培养人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3),用不同浓度的LPS、p38MAPK和JNK信号通路抑制剂(分别为SB203580、SP600125)分别刺激细胞24h,用
目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Western blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表达…
目的探讨MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在瑞芬太尼预处理减轻心力衰竭大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法成年雄性SD大鼠,尾静脉注射阿霉素,制备慢性心力衰竭模型,通过随机数字表将72只模型大鼠分为9组:假手术组(sham,n=9),缺血再灌注组(IR,n=9),瑞芬太尼预处理组(RPC,n=9),ERK抑制剂PD98059+RPC组(RPD,n=9),p38抑制剂SB203580+RPC组(RSB,n=9),JNK抑制剂SP600125+RPC组(RSP,n=9)以及抑制剂对照组PD(n=6)、SB(n=6)、SP(n=6)。化…
研究背景严重烧伤又称“烧伤病”,它所带来的问题不只是皮肤的损伤,还引起全身各系统和各脏器代谢和功能的一系列变化。近年来,有人称烧伤为“一种创伤后炎症反应性疾病”(a

post-trauma inflarnmato- ry disease)。“反应性”是生物固有的特性,对于多细胞、多脏器、多系统的高级生物来说,位于深部的细胞无法直接接受外部环境的刺激,在很大程度上根据来自其它细胞的信息调整自身的反应。细胞与细胞之间的信息交流除了靠神经系统之外,还通过信号细胞释放的各种信号物质,当这些物质作为“配体”与靶细胞的受体相结合时,就能改变靶细胞的代谢和功能。受体后信号调控是指对配体受体结合后发生的…
目的:探讨P38MAPK在大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤发病机制中的作用,观察肺组织中炎症因子水平、血中内毒素、淀粉酶含量等相关指标的变化及中药清胰汤的影响,进一步明确清胰汤的作用机理。方法:健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组、清胰汤组。除假手术组外,其余三组大鼠经胰胆管逆行注入去氧胆酸钠复制大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤模型。柳制剂组为术前1h腹腔注射SB203580,1mg/Kg。清胰汤组于术前1h及术后清醒时灌胃,1ml/kg。术后24h采取标本做病理检查和各项指标检测。肺组织ICAM-1、P38MAPK的检测方法采用Western Selleck Rucaparib Ceritinib研究购买 Blot法。肺组织TNF-a检测采用放免法。肺…
目的:观察p38MAPK信号通路抑制剂–SB203580对内毒素休克大鼠生物喋呤／NO表达的影响,并探讨 p38MAPK信号通路在生物喋呤诱生中的作用机制及意义。方法:采用内毒素休克模型,56只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=32)和SB203580拮抗组(n=16),留取肝、肺、肾组织测定三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP-CHI)与诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达,同时测定血浆与相应器官中BH4、
目的动脉粥样硬化(AS)已公认是一种炎症反应性疾病,诱导型环氧合酶(COX-2)及CD40与其配体

Histone Demethylase 抑制剂 concentration (CD40L)参与AS进程的多种炎性因子调节。CD40L对COX-2表达影响的研究尚不多见,为此,我们观察了 rhCD40L刺激对U937细胞表达COX-2的影响,并从细胞内信号转导通路的水平探讨其潜在的机制。方法以终浓度为0．05、0．1、0．2、0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激U937细胞;0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激3、6、12、24h;RI:PCR及Westen blot分别检测 COX-2mRNA和蛋白表达,ELISA检测PGE2活性代表COX- 2酶活性。分…
目的探讨p38蛋白激酶对LPS诱导肺泡巨噬细胞活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)干预组、PDTC(NF-κB抑制剂)干预组和SB203580+PDTC干预组。分别采用免疫细胞化学和蛋白质印迹检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB 抑制蛋白(Ⅰ-κB)的表达。结果 LPS刺激肺泡巨噬细胞胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,胞核染色阳性细胞百分比分别由正常对照组的(7．34±1．33)％、(6．12±2．15)％上升到(38．52± 9．71)％、(35．20±8．51)％,而Ⅰ-κB的表达较正常对照组显…
目的探讨P38MAPK与iNOS在肾脏缺血预处理时两者的上下游关系,旨在阐明肾脏缺血预处理延迟保护的可能机制。方法选用180-220g雄性wistar大鼠60只． SB203580(P38MAPK特异性抑制剂),氨基胍(AG)(iNOS特
目的:乳腺癌是女性最普遍的恶性肿瘤,乳腺癌转移是造成患者死亡的主要原因,迄今为止乳腺癌转移的发病机理尚不清楚。我们前期建立了具有高转移倾向的乳腺癌 LM—MCF-7细胞系。本文应用MLCK的特异性抑制剂 ML-7作用LM—MCF-7细胞,旨在进一步探讨ML-7在 LM—MCF-7细胞生长、浸润、运动和凋亡等方面的作用。此外,还应用多种激酶相关抑制剂,采用免疫荧光、免疫印迹等实验方法对上述作用的机制和相关信号传导途径进行了深入研究。方法:应用20 μmol／L ML-7作用于LM— MCF-7细胞,测定细胞生长曲线并应用MTT检测细胞的增殖变化,台盼兰染色检测细胞的死亡率,应用Annexin V…
目的观察红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白免疫印迹测定 p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达。结果不同浓度红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)均有明显抑制作用,呈剂量时间依赖关系;红茶多酚(0.

05),随干预时间延长表现为先上升后下降趋势,6h时AGT mRNA表达量水平最高。2)Epo干预心肌p-ERK1/2的升高可被依那普利和替米沙坦所逆转。3)p-ERK1/2的阻断,并不能逆转Epo对于AGT mRNA表达的促进作用。 结论:Epo可上调心肌细胞中AGT基因的转录,Epo激活ERK信号通路与RAS系统存在相互关系。
酿酒酵母ScRck2p是一种MAP selleck抑制剂 Knase激活的蛋白激酶,被Hog1p磷酸化而激活,响应于细胞对外界高渗透压胁迫和氧化胁迫。在本工作中我们发现酿酒酵母ScRCK2基因的缺失能够导致细胞对TOR抑制剂——雷帕霉素敏感,但ScRCK2在细胞对雷帕霉素敏感过程中的作用并不依赖于其激酶活性。在人体内最常见的机会致病菌-白念珠菌中,我们鉴定了ScRCK2的同源基因CaRCK2,并发现CaRCK2基因的缺失同样导致白念珠菌细胞对雷帕霉素敏感,CaRck2p的这一作用同样不依赖于其激酶活性。此外,我们发现白念珠菌CaHOG1的缺失也导致细胞对雷帕霉素的敏感。这些结果表明在酿酒酵母菌和白念珠菌中,作用于HOG途径下游的RCK2可能调控TOR信号途径的功能。

同时,我们发现白念珠菌CaRCK2基因的缺失能够导致细胞对高渗胁迫、氧化胁迫和细胞壁完整性胁迫试剂敏感。比较而言,酿酒酵母ScRCK2基因的缺失只引起细胞对氧化胁迫敏感,而不影响细胞对高渗胁迫和细胞壁完整性胁迫试剂的敏感。但是,酿酒酵母ScRCK2基因却能够弥补白念珠菌CaRCK2基因缺失株对高渗胁迫、氧化胁迫和细胞壁完整性胁迫试剂的敏感性表型。这些结果说明RCK2在细胞内发挥多种功能,但在白念珠菌和酿酒酵母菌中的功能存在分歧。 我们还发现,ScRCK2上游激酶基因ScHOG1和ScPBS2的缺失,以及受ScHOG1调控的转录因子基因ScHOT1,ScMSN1,ScMSN2,ScMSN4或ScRLM1的缺失,不影响酵母细胞对雷帕霉素的敏感性。但是,白念珠菌CaHOG1基因的缺失能够导致细胞对雷帕霉素敏感。这些结果表明白念珠菌HOG途径与酿酒酵母HOG途径在细胞功能调控方面存在分歧,它参与细胞对雷帕霉素敏感性的调控。
第一部分 淫羊藿苷对卵蛋白诱导大鼠哮喘性气道炎症的影响 目的：观察淫羊藿苷对卵蛋白诱导大鼠哮喘性气道炎症的影响。

方法：(1)72只雄性SD大鼠随机分为6组,每组12只,分别是正常对照组(PBS)、模型组(OVA)、阳性对照组(OVA+地塞米松组)和OVA+淫羊藿苷低、中、高剂量组(5、10、20mg/kg-1);(2)采用卵蛋白(OVA)致敏和反复激发大鼠建立哮喘模型；(3)采用HE染色观察淫羊藿苷对OVA诱导的大鼠肺组织炎症浸润的干预作用及病理学评分的影响；(4)观察6组外周血总细胞数、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞计数情况；(5)采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-4、IFN-γ、IL-13和TNF-α的含量；(6)取各组大鼠肺泡灌洗液,采用酶联免疫吸附测定法检测肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ的含量。

mTOR抑制剂 结果：(1)淫羊藿苷对大鼠哮喘模型肺组织病理学和炎症分级评分影响的结果显示：OVA+淫羊藿苷高剂量组支气管、血管和周围肺组织有炎性细胞浸润,支气管上皮可见部分损伤,与模型组相比较,支气管上皮和血管周围的炎症有所减轻。模型组大鼠肺组织炎症评分明显高于正常对照组, 更多 OVA+淫羊藿苷高剂量组与模型组相比较,炎症评分降低,差异有显著性(P<0.05)；(2)淫羊藿苷对大鼠哮喘模型外周血细胞计数的影响结果显示：模型组外周血总细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞与正常对照组相比较均显著增加,OVA+淫羊藿苷高剂量组对嗜酸性粒细胞和巨噬细胞抑制明显,差异有显著性(P<0.05)；(3)淫羊藿苷对大鼠哮喘模型外周血细胞因子影响的结果显示：模型组大鼠血清IL-4、IL-13和TNF-α水平与正常对照组相比较均显著增加,血清IFN-γ水平显著降低。OVA+淫羊藿苷高、中剂量组对哮喘大鼠血清IL-4、IL-13和TNF-α水平抑制明显,差异具有显著性(P<0.05),淫羊藿苷高剂量组能够增加大鼠哮喘模型血清IFN-γ的表达水平,差异有显著性(P<0.05)；(4)淫羊藿苷对大鼠哮喘模型肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ表达影响的结果显示：模型组大鼠肺泡灌洗液中IL-4表达明显高于正常对照组；OVA+淫羊藿苷高剂量组与哮喘模型组相比较,大鼠肺泡灌洗液中IL-4表达明显降低,差异有显著性(P<0.05),哮喘模型组大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ表达明显低于正常对照组,淫羊藿苷治疗组与哮喘模型组相比较,大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ表达有所升高,差异有显著性(P0.05)；(2)各组大鼠肺组织GATA-3和T-bet免疫组化染色结果显示,OVA+淫羊藿苷高剂量组GATA-3染色明显减少,T-bet染色没有明显减少；(3)各组大鼠肺组织和脾脏淋巴细胞T-bet和GATA-3 mRNA表达结果显示,淫羊藿苷治疗组与哮喘模型组相比较,大鼠肺组织中T-bet和GATA-3 mRNA表达明显降低,差异有显著性(P0.

9%、13.8%及23.9%。BMI越高,年龄越大糖尿病、高血压患病的相对危险度越高。 (二) 动物模型研究: 1. MS组体重、Lee’s指数和腹围显著高于对照组,表现出腹型肥胖体型。 2. MS组大鼠的WAT重量、VAT总量及其内脏脂肪系数均显著高于对照组,各部位WAT细胞的面积、大脂肪细胞数量均明显高于对照组。 3. MS组大鼠血压、FINS、LDL和TG、FFA均明显高于对照组。 病理切片可见,MS组大鼠BAT结构松散;棕色脂肪细胞内脂滴增大、增多。肝组织,部分肝细胞脂肪变性,肝板结构消失。

(三) 分子生物学实验: 1. MS肥胖大鼠脂肪组织中AGT mRNA的表达:皮下脂肪组织(Sub)中AGT mRNA的表达明显低于对照组,而BAT、VAT中AGT mRNA的表达均显著高于对照组。 2. MS肥胖大鼠脂肪组织中肾素mRNA的表达:BAT中mRNA的表达明显低于对照组而Sub中mRNA的表达显著高于对照组,VAT中与对照组无显著性差异。 3. MS肥胖大鼠脂肪组织中ACE mRNA的表达:在Sub中表达明显低于对照组,而BAT和VAT中ACE mRNA的表达均显著高于对照组。 4. MS肥胖大鼠脂肪组织中AT1 mRNA和蛋白表达:在BAT中AT1 mRNA和蛋白表达明显低于对照组,VAT中AT1 信号通路 mRNA和蛋白表达均显著高于对照组,而Sub中AT1 mRNA的表达高于对照组,AT1蛋白的表达与对照组无显著性差异。 5. MS肥胖大鼠脂肪组织中ACE2及AT2 mRNA的表达:在MS肥胖大鼠和对照组大鼠中,各部位脂肪组织均未发现ACE2及AT2 PARP抑制剂 mRNA的表达。 6. MS肥胖大鼠脂肪?
从我们的大规模cDNA克隆和测序计划中,利用表达谱基因芯片筛选的结果并通过生物信息学分析,我们选取了2条基因进行进一步的研究,以探讨这些基因的功能。 外界刺激通过细胞内的蛋白激酶反应链,将信号从细胞膜传导到核,导致相关转录因子的磷酸化和被激活,从而引起基因表达的变化。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element binding protein,CREB)也许是其中最具特点的刺激诱导转录因子我们实验室克隆了一个人类CREB的新基因(CREB4),该基因编码一个395个氨基酸的蛋白,并与小鼠的CREB3高度同源。RT-PCR显示CREB4在胰腺、前列腺、脑和骨骼肌组织中表达,在小肠、外周血白细胞、睾丸和胸腺组织中低表达,而在成人胎盘、心脏、脾脏、卵巢、肾脏、肝脏、肺和结肠组织中未检测到特异性条带,在检测的各肿瘤组织中显示CREB4基因只在结肠癌

(CX-1和GI-112)、肺癌(LX-1)、前列腺癌(PC-3)和胰腺癌(GI-103)有表达,而在乳腺癌(GI-101)、卵巢癌组织(GI-102)和肺癌组织(GI-117)中未测到特异性条带。通过生物信息学将CREB4定位于人染色体1q21.3。表达谱芯片结果显示CREB4基因在肝癌组织上调。GFP荧光定位显示全长CREB4定位与细胞质内,而去C端的突变体定位与细胞核。采用酵母双杂交系统以寻找与CREB4相互作用的蛋白。我们发现CREB4可以与核孔复合物相关蛋白TPR及kayopherinα2相互作用,而这两个蛋白都与蛋白质的核转运有关,推测CREB4可能通过它们进入细胞核。 蛋白4.1是红细胞中以血影蛋白(spectrin)为基础的细胞膜骨架的一个基本成分,在维持红细胞质膜的形态和机械性能方面起着至关重要的作用。我们克隆了一个新的蛋白4.1基因(4.1O)。该基因全长2312bp,编码一个553氨基酸的蛋白。RT-PCR显示4.1O只在

卵巢组织中检测到特异性条带,在胎胸腺组织和胎脑组织中低表达。生物信息学分析显示4.1O含有14个外显子和13个内含子,定位于人染色体9q21-9q22区段上。表达谱芯片结果提示4.1O基因在肝癌组织和胃癌组织中表达上调。
第一部分 Staurosporine小白鼠 榄香烯在喉癌化疗中作用机制的体外研究 目的:探讨榄香烯对人喉鳞癌细胞株 HEp-2 细胞和 AMC-HN-8 细胞的抑制作用; 以及与凋亡相关的 Caspase-3 活性的改变;探讨榄香烯抑制人喉癌细胞株过程中 真核细胞翻译起始因子 eIF 家族成员(eIF4E、eIF4G)与肿瘤新生血管有关的 bFGF、VEGF 的表达情况。方法:使用 MTT 法和流式细胞分析技术(FCM), 研究榄香烯诱导人喉癌细胞株凋亡的作用;并使用比色法,研究榄香烯诱导人喉 鳞癌细胞株凋亡时 Caspase-3 活性的变化;以及使用 Westernblot 和 RT-PCR 法检 测榄香烯作用的人喉癌细胞株中 eIF4E、eIF4G、bFGF、VEGF 在 mRNA 和蛋白 水平的表达。结果:榄香烯抑制人喉癌细胞株 HEp-2 细胞和 AMC-HN-8 细胞有 时间剂量依赖性(HEp-2 细胞 24 小时 IC50值为 69.297μg/ml,AMC-HN-8 细胞 24 小时 IC50值为 70.

After per-meabilization of muscle cells, the Gi3 antibody inhibited bombesin-induced smooth muscle cell contraction. RESULTS: Incubation of 点击此处 permeabilized circular muscle cells with PLC-β3 antibody could inhibit bombesin-induced contraction. H-7, chelerythrine (PKC inhibitor) and genistein (protein tyrosine kinase inhibitor) inhibited bombesin-induced contraction, but DAG kinase inhibitor, R59949, could not inhibit it. To examine which mitogen-activated protein kinase (MAPK) was involved in bombesin-induced contraction, the specific MAPK inhibitors (MEK inhibitor, PD98059 and p38 MAPK inhibitor, SB202190) were used. Preincubation of PD98059

blocked the contraction induced by bombesin in a concentration-dependent manner. However,

SB202190 had no effects on contraction. CONCLUSION: Bombesin-induced circular muscle cell contraction in cat esophagus is madiated via a PKC or a PTK-dependent pathway NLG919体内 or p44/p42 MAPK pathway.
目的:观察p38MAPK信号转导通路在17β-雌二醇和雷洛昔芬促成骨细胞增殖和分化过程中的作用。方法:取第一继代BALB/c小鼠头盖骨成骨细胞,药物刺激组分别加入不同浓度17β-雌二醇或雷洛昔芬;含阻断剂组预先添加不同浓度的SB202190(p38MAPK的阻断剂)阻断信号转导通路,再加17β-雌二醇或雷洛昔芬,作用72h后用MTT法与PNPP法测定细胞的增殖能力和碱性磷酸酶活性。结果:加入雌激素或雷洛昔芬后,成骨细胞的增殖和分化明显增强,与空白对照组比较差异具有显著性意义(P<0·05);阻断p38MAPK信号转导通路后,细胞增殖分化受到明显抑制,与未阻断组比较差异具有非常显著性意义(P<0.01)。结论:p38MAPK在17β-雌二醇和雷洛昔芬诱导的小鼠成骨细胞的増殖和分化过程中发挥重要作用。
目的:观察牛磺酸(Tau)对烧伤后心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:选健康W istar大鼠50只,随机分为对照组、烧伤组(造成30%TBSAⅢ度烧伤)、烧伤+牛磺酸组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸,200 mg/kg)、烧伤+牛磺酸(Tau)+SB202190组及烧伤+SB202190组(烫伤后立即注射SB202190,10 mg/kg)。末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,放射免疫法测定TNFα含量,荧光分析法测定caspase-3活性及免疫组化分析心肌Fas、caspase-8、Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果:烧伤组心肌细胞凋亡指数(18.69±2.47)显著高于对照组(0.48±0.05)(P<0.01)。Tau组和Tau+SB202190组心肌细胞凋亡指数分别为3.15±0.41和1.63±0.31,显著低于烧伤组。心肌TNFα、Fas、caspase-8和Bax蛋白表达及caspase-3活性均不同程度低于烧伤组(P<0.05)。结论:牛磺酸对烧伤后心肌细胞凋亡有较好的抑制作用,其机制可能是牛磺酸调控了部分凋亡相关基因的表达和减少TNF-α的生成。
AIM:To

examine the pathway related to the IL-1β-induced 许多 activation of mitogen-activated protein(MAP)kinases in cat esophageal smooth muscle cells.METHODS:Culture of the esophageal smooth musclecells from cat was prepared.Specific inhibitors weretreated before applying the IL-1β.Western blot analysiswas performed to detect the expressions of COX,iNOSand MAP kinases.RESULTS:In the primary cultured cells,although IL-1βfailed to upregulate the COX and iNOS levels,the levelsof the phosphorylated forms of p44/42 MAP kinase andp38 MAP kinase increased in both concentration-andtime-dependent manner,of which the level of activationreached a maximum within 3 and 18 h,respectively.The pertussis toxin reduced the level of p44/42 MAPkinase phosphorylation.Tyrphostin 51 and genistein alsoinhibited this activation.Neomycin decreased the densityof the p44/42 MAP kinase band to the basal level.Phosphokinase C(PKC)was found to play a mediatingrole in the IL-1β-induced p44/42 MAP kinase activity.In contrast,the activation of p38 MAP kinase wasinhibited only by a pretreatment with forskolin,and wasunaffected by the other compounds.

2采取5,5-二甲基-1,3-环己二酮与亚联氨基(肼叉)氯在碱性条件下合成芳香吲唑酮类化合物。方法：4-取代芳香胺在酸性条件下与亚硝酸钠在冰浴中得到4-取代芳香重氮盐,调节pH至5后滴加2-氯乙酰乙酸乙酯的乙醇溶液,得到4-取代肼叉氯化合物。乙醇重结晶后在碱性条件下与5,5-二甲基-1,3-环己二酮发生亲核取代、脱水反应后,经过柱层析得到9个最终产物：4-(3-乙氧羰基-6,6-.甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑-1-基)苯甲酸,1-(4-溴苯基)-6,6-二甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,1-(4-磺胺基)-6,6-二甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,1-(4-氟苯基)-6,6-二甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,6,6-二甲基-4-氧-1-(4-(三氟甲基)苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,6,6-二甲基-1-(4-硝丛苯丛)-4-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,6,6-二甲基-4,氧-1-对位甲苯基-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,6,6-二甲基-4-氧-苯基-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-3-羧酸乙酯,1-(4-氰基苯基)6,6-二甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢-1H-吲唑-羧酸乙酯,结构均经1HNMR和MS确证。

www.selleckchem.cn/products/KU-60019.html 2合成所设计的Hsp90抑制剂 将得到的三种芳香吲唑酮类化合物在DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中用HBTU(苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐)与4-氨基环己醇发生酰胺化反应,得到三个所设计的Hsp90抑制剂,结构经1H NMR和MS确证。 二Hsp90抑制剂的活性筛选 近年来发现Hsp90抑制剂的作用机制是通过与Hsp90a蛋白中N端的ATP活性中心相结合,并以此为基础使用荧光偏振法来检测Hsp90a结合模型,即用荧光偏振的方法测定所合成的化合物AX1319对于Hsp90a的亲和力。利用荧光偏振原理,在均相溶液中,以标记的AX1319作为配基,与Hsp90a蛋白作用,采用荧光偏振仪检测荧光偏振值。以竞争性结合方式评价AX1319对于Hsp90a的亲和力。结果显示AX1319具备一定的Hsp90亲和力,这种结构作为Hsp90抑制剂是可行的。

三AX1319的工艺优化研究 对AX1319合成路线中关键步骤进行工艺优化研究,考察反应试剂,温度,时间,碱量对于目标产物产率的影响。方法：采用Agilent1100高效液相色谱为检测手段,采用外标法以目标化合物的保留时间作为对照峰,检测在不同反应条件下所得到的反应液中产物峰的相对含量,实验表明：采用乙醇钠／乙醇反应条件,于120摄氏度,2e.q.乙醇钠反应16h的产率较高。
目的：热休克蛋白90(heat

那个 YM155细胞系 shock protein90，HSP90)是一组在真核和原核细胞中都普遍存的高度保守的分子伴侣，由基因编码不同的Hsp90α和Hsp90β两个亚型组成。HSP90已被证实在多种恶性肿瘤中高度表达，但是多肿瘤细胞中Hsp90α呈高表达而Hsp90β的表达却基本不变,提示HSP90α与肿瘤细胞的关系更加密切，而且代表了恶性肿瘤的潜在治疗靶点。17-AAG作为HSP90的抑制剂，可以通过占据HSP90的ATP结合位点干预HSP90与客户蛋白的结合，诱导HSP90与其客户蛋白的分离和降解，在体外培养的多种恶性肿瘤细胞中均表现出抗肿瘤的活性，目前已进入临床Ⅲ期试验阶段。然而有关17-AAG对食管鳞癌细胞株和HSP90α表达的影响的文献报道不多。 HIF-1是一种受氧水平调控的转录因子，作为一种转录激活剂，HIF-1主要通过肿瘤细胞对缺氧的适应和血管再生等方面的作用促进肿瘤的生长和转移。HIF-1α作为HIF-1的亚型，在前列腺癌、乳腺癌、结肠癌和肺癌等多种常见恶性肿瘤及其转移灶中过度表达。近期包括Takala H在内的多项研究表明，HIF-1α在食管鳞癌中的表达也呈现高表达。在之前的研究中，转录因子HIF-1α已被证实为HSP90的客户蛋白，在维持HIF-1α活性方面HSP90发挥重大作用。最新的研究表明，GA、17-AAG可以诱导前列腺癌、肝癌等恶性肿瘤细胞中HIF-1α的降解，抑制肿瘤的侵袭和转移。而有关17-AAG对食管鳞癌细胞中HIF-1α表达影响的研究未发现。 本研究分别应用免疫染色测定HSP90α在食管鳞癌组织及细胞中的表达；MTT法和流式细胞术检测17-AAG对食管鳞癌细胞株增殖及凋亡的影响；RT-PCR和Western分析17-AAG对HIF-1α在基因水平和蛋白水平的影响极其相关性。 方法： 1食管鳞癌组织HSP90α的表达及临床意义。 40例包括癌组织、癌旁和正常组织的标本均取自河北医科大学第四医院胸外科住院的食管癌患者。全部病例术前均未行放、化疗，且癌组织经病理学证实均为食管鳞状细胞癌，癌旁及正常组织均经HE染色证实未被癌细胞浸润。采用免疫组织化学SP法检测标本中癌组织、癌旁组织、正常粘膜组织的HSP90α的表达。并利用统计软件SPSS13.

Conclusions: The proposed Mass ARRAY technology-based multiplex method can detect genetic mutations in Chinese lung cancer patients. Therefore, the proposed method can be applied to detect mutations in other Angiogenesis抑制剂 cancer tissues.
During the last decade, we have seen tremendous progress in the therapy of lung cancer. Discovery of actionable mutations

in EGFR and translocations in ALK and ROS1 have identified subsets of patients with excellent tumor response to oral targeted agents with manageable side effects. In this review, we highlight treatment options including corresponding clinical trials for oncogenic alterations affecting the receptor tyrosine 许多 kinases MET, FGFR, NTRK, RET, HER2, HER3, and

HER4 as well as components of the RAS-RAF-MEK signaling pathway.
克唑替尼能有效地治疗间变淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性的非小细胞肺癌(NSCLC),给这类患者带来巨大的临床获益。ALK激酶区二次突变、ANL融合基因的扩增或其他信号通路的异常活化等都是非常典型的耐药机制。本文针对ALK阳性NSCLC患者经克唑替尼治疗后耐药机制及克唑替尼耐药后的应对策略的研究进展进行综述。
非小细胞肺癌脑转移发生率高,是肺癌致死率高的原因之一。目前分子靶向治疗被认为是非小细胞肺癌脑转移治疗的重要手段,被认为是全脑放疗、立体定向放疗和化疗之后肺癌脑转移新的治疗手段。近年来随着肿瘤学的发展,分子靶向治疗在非小细胞肺癌脑转移治疗方面是越来越重要。本文主要针对非小细胞肺癌脑转移靶向治疗现状进行述评。
美国FDA于2016年3月11日批准辉瑞公司生产的Xalkori(crizotinib,克唑替尼)增加新的适用证,即用于治疗ROS-1基因突变型晚期(转移性)非小细胞肺癌,这是FDA批准的首个用于此适用证的药品,并同时获授予孤儿药地位。
目的建立高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中克唑替尼的质量浓度。方法用蛋白沉淀法处理血浆,色谱柱:Aglient ZORBAX XDB-C8柱,流动相:甲醇-0.1%甲酸+2 mmol·L~(-1)甲酸铵,梯度洗脱,流速:0.35 m L·min~(-1),柱温:室温,用正离子扫描,多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中克唑替尼的回归方程为y=3.91×10-3x+1×10-3(r=0.999

4);克唑替尼在5～1000 ng·mL~(-1)内线性关系良好,最低定量下限为5 ng·mL~(-1)。血样日内与日间RSD均小于15%,平均回收率>95%,且稳定性较好。结论本方法简便快速、灵敏准确、特异性强,适用于人体克唑替尼血药浓度的测定。
ALK~+弥漫大B细胞淋巴瘤(anaplastic 一般 lymphoma kinase-positive diffuse large B-cell lymphoma,ALK~+DLBCL)是淋巴瘤中一种罕见的和具有明显差异性的病理类型,2008年WHO将其归类为DLBCL一个独特的亚型,该病侵袭性高,容易复发,目前尚无规范有效的治疗方案。采取多学科协作体系(multidisciplinary treatment,MDT)有利于制定规范化、个体化的治疗方案,探索针对ALK~+DLBCL患者更有效的治疗方法,从而让更多的患者获益。本研究分享1例2012年1月天津医科大学肿瘤医院收治的ALK~+DLBCL高剂量化疗联合自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation,AHSCT)后复发,采用ALK激酶抑制剂克唑替尼(Crizotinib)治疗成功的案例。
表皮生长因子受体(EGFR)是一种具有酪氨酸激酶活性的受体;棘皮类微管相关样蛋白-4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)是EML4与ALK的融合基因,EGFR突变及EML4-ALK阳性都能促进肿瘤细胞增殖并抑制肿瘤细胞的凋亡。研究发现,在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中有大量出现EGFR突变及EML4-ALK阳性,且当前对于该类患者EGFR和ALK抑制剂是首选治疗方式。但此治疗方式易出现耐药而限制其作用效果,因此探寻其耐药机制及耐药后治疗的新策略显得尤为重要。目前关于NSCLC耐药机制的研究已经逐步展开,并且逆转NSCLC患者获得性耐药的治疗策略也已有了初步的成效。本综述旨在总结EGFR突变和ALK阳性的NSCLC患者获得性耐药机制的新进展和克服耐药的新策略。
目的:探讨克唑替尼治疗晚期间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因阳性中晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的近期疗效及毒副反应。方法:回顾性分析43例ALK阳性的中晚期NSCLC患者,服用克唑替尼治疗,服用至病情进展或出现不可耐受的毒副反应,随访12个月,观察疗效。结果:克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC的疾病控制率(disease control rate,DCR)为93%(3/43),客观缓解率(objective response rate,ORR)为62%(26/43),中位无进展生存时间(progression free survival,PFS)为7.0个月(95%CI,6.0~8.

05)。与正常组比较,模型组大鼠精子数量较少且形态异常(P<0.05);与模型组比较,金匮组和阻滞剂组睾酮(T)、雌二醇(E2)、精子密度和活率升高(P0.05)。结论金匮肾气丸可改善肾阳虚模型大鼠精子质量和性激素水平,其机制可能是通过抑制睾丸TGF-β1受体表达、促进CYP19表达进而影响精子发育与增殖。
目的:探讨雌激素对小鼠泌尿生殖系统以及人子宫内膜癌细胞系中的LOX家族基因表达的影响。创新点:系统地研究了雌二醇在小鼠泌尿生殖系统(子宫、阴道和膀胱)以及人子宫内膜癌细胞系中对LOX家族基因表达的影响;提出了转化生长因子-β(TGF-β)信号通路可能在雌二醇调节LOX家族中发挥作用。方法:使用雌二醇对卵巢快速衰老小鼠和人子宫内膜癌细胞系进行处理,然后通过荧光实时定量聚合酶链式反应(PCR),分别从体内和体外研究雌二醇对LOX家族基因表达的影响(图2~5)。在人子宫内膜癌细胞系中加入TGF-β1,通过荧光实时定量PCR,检测LOX家族基因表达的变化(图6)。利用人子宫内膜癌细胞系为对象,进行分组研究:一组无任何处理,为对照组;一组只加雌二醇;一组则同时加入雌二醇和TGF-β受体抑制剂(SB431542)。24小时后,检测LOX家族基因及TGF-β1的表达(图6)。结论:雌二醇可以促进卵巢快速衰老小鼠和人子宫内膜癌细胞系中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4和TGF-β1表达的升高,其中雌二醇很有可能是通过TGF-β信号通路影响LOX家族基因的表达量。由于LOX家族基因与盆腔疾病关系密切,所以我们的发现可能为临床上盆腔器官疾病的预防和治疗提供一些理论基础。

目的:研究转化生长因子β1/整合素连接激酶(transforming

Foretinib 价格 growth factor-beta1/integrin-linked kinase,TGF-β1/ILK)信号通路在白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT)中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂(SB431542)阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth

muscleactin,α-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)含量。结果:与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加(P<0.05),大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化(P

目的:比较结缔组织生长因子(CTGF)在瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常真皮成纤维细胞(NF)中的表达以及对血清刺激的反应;研究介导CTGF在KF中表达的信号途径。方法:在血清刺激前30min给予小分子人工合成的信号通路抑制剂预处理,分别为:PI3K抑制剂wortmannin(100nM);ERK抑制剂PD98059(50mM);p38MAPK抑制剂SB203580(10mM);JNK抑制剂SP600125(25mM);以及TGF-βI型受体抑制剂SB431542(0.1μM、0.5μM、1μM和10μM),空白对照组仅加入溶剂DMSO预处理。使用定量实时反转录聚合酶链反应比较CTGF在瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤来源的成纤维细胞(NF)中的表达。结果:KF血清刺激后CTGF的表达迅速升高,而在NF血清刺激后仅少量上升。JNK抑制剂SP600125和TGF-βI型受体抑制剂SB431542对CTGF表达的升高具有显著的抑制作用(P<0.05)。结论:KF中的CTGF血清反应需要JNK和TGF-β信号途径的协同作用。
目的:探讨B型钠尿肽(BNP)抑制心成纤维细胞(CFs)增殖机制与转化生长因子-β1(transforming

SGI-1776订单 www.selleckchem.cn/products/GDC-0449.html growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号传导途径的关系。方法:原代提取乳鼠的心CFs,以重组人心肌营养素刺激细胞增殖,分为:BNP组(A组)、SB431542组(B组)、BNP+SB431542组(C组)、对照组(D组)。收集培养液检测细胞因子TGF-β1,收集细胞提取总RNA以荧光实时定量RT-PCR检测Smad4 mRNA变化。结果:A、B、C组TGF-β1浓度较D组明显降低而Smad4 mRNA的△CT值较D组明显升高(P0.05);C组Smad4 mRNA△CT值高于A组和B组。结论:BNP抑制CFs增殖机制除了TGF-β1/Smad2/3信号途径,还可能存在TGF-β1非Smad2/3信号传导途径。
本文探索了应用反向对接技术研究激酶抑制剂选择性的可行性。首先通过收集晶体结构数据或使用同源建模方法建立了包含422个激酶的靶点三维结构数据库,在此基础上建立了反向对接激酶靶点筛选方法,并对相关参数和打分函数进行了优选。最后,选取了7个典型的选择性激酶抑制剂作为例子,用于测试该反向对接激酶靶点筛选方法。结果表明,这些激酶抑制剂的选择性作用靶点均具有较高的打分值(打分值均排在所测试激酶的35%以内)。本文的研究提示,反向对接技术可以应用于激酶靶点虚拟筛选,并进而应用于激酶抑制剂的选择性研究。
目的:观察血管紧张素-(1-7)对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖以及Smad3、Smad7mRNA表达的影响。方法:分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,以Ang-(1-7)、TGF-β1、Ang-(1-7)+TGF-β1组、TGF-βⅠ型受体抑制剂等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,RT-PCR测定心脏成纤维细胞Smad3、Smad 7mRNA的表达。结果:①与空白对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的OD值增加(P<0.

05）。 5Western blot结果显示，与Vehicle组相比，H-AS在24h和72h可明显降低胞浆HMGB1、TLR4及胞核NF-κB的蛋白表达，结果有统计学差异（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可降低胞浆HMGB1、TLR4及胞核NF-κB，但无统计差异学（P＞0.05）。 哪里 6与免疫组化和Western blot结果一致，H-AS在24h和72h可明显降低TLR4及NF-κB的mRNA表达，结果有统计学差异（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可降低胞浆TLR4及NF-κB在mRNA水平的表达，但无统计学差异（P＞0.05）。而HMGB1在基因表达水平无统计学差异。 结论：阿利吉仑对缺血再灌注小鼠有较好的神经保护作用，可改善脑缺血损伤后的神经功能缺失，减轻脑水肿，减小脑梗死体积，同时缺血再灌注损伤后的脑组织的HMGB1、TLR4及NF-κB的表达变化与脑组织损伤程度一致，提示脑缺血再灌注后HMGB1/NF-κB通路参与了缺血后损伤；阿利吉仑可下调TLR4表达、抑制HMGB1、NF-κB的转位，从而减轻缺血后的过度炎症反应，实现缺血后的神经保护作用。

第二部分阿利吉仑对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的抗氧化作用及其相关机制研究 目的：观察脑缺血再灌注损伤后ERK/HO-1通路的表达变化以及SOD活性和MDA含量的变化，研究阿利吉仑对脑缺血再灌注损伤所致的氧化应激反应的作用，探讨阿利吉仑抗氧化作用的相关机制。 方法：选用成年雄性C57/BL小鼠为研究对象，应用改良线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型。随机将C57/BL小鼠分为5组：假手术组（Sham），溶剂对照组（Verhicle），阿利吉仑低剂量组（L-AS），阿利吉仑高剂量组（H-AS），阿利吉仑+PD98059组（AS+PD98059)。Sham组：假手术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；Vehicle组：术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；小剂量阿利吉仑干预组(L-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑10mg/Kg，每日一次；大剂量阿利吉仑干预组(H-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次；阿利吉仑+PD98059组（AS+PD98059)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次，术后立即腹腔注射50mg/kg

PD98059。各组取材前进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色评价脑梗死体积，检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性，丙二醛（MDA）含量的变化情况，分别用免疫组化，Western-blot和RT-qPCR的方法检测缺血脑组织中ERK、HO-1蛋白和mRNA水平的变化。 结果： 1Sham组中未见小鼠神经功能缺损，神经功能缺失评分为0分；Vehicle组在24h和72h神经功能缺损评分均较严重，L-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可降低神经功能缺损，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低神经功能缺损，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对神经功能缺损的这种改善作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）； 或者 2与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可降低脑含水量，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑含水量，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对脑水肿的降低作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）； 3与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可减小脑梗死体积，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑梗死体积，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对脑梗死体积这种减小作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 购买LY2228820 4免疫组化结果显示，与Vehicle组相比，缺血后24h和72h，H-AS组在24h和72h均可明显升高p-ERK、

HO-1的阳性细胞数，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高p-ERK、HO-1的阳性细胞数，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1阳性细胞数的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 5Western blot结果显示，与Vehicle组相比，H-AS在24h和72h可明显升高p-ERK、 HO-1的蛋白表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高p-ERK、HO-1的蛋白表达，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1蛋白的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 6与免疫组化和Western blot结果一致，H-AS在24h和72h可升高ERK、HO-1的mRNA表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高ERK、HO-1的mRNA表达，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1mRNA的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 7与Vehicle组相比，H-AS可明显增加SOD，减低MDA的含量，差异有统计学意义（P＜0.05）。L-AS组可增加SOD，减低MDA的含量，差异有统计学意义（P＜0.

通过比较现实工作中晚期非小细胞肺癌NSCLC患者生存期的差异,分析其影响因素。2.初步分析现实工作中药物对晚期NSCLC疗效的影响。方法:本研究收集西京医院呼吸内科2011年3月至2013年6月收住的764例晚期NSCLC患者,按治疗与未治疗及性别之间比较OS。进而,对其中接受治疗的638例晚期NSCLC患者,根据年龄、性别、肿瘤分期、吸烟史、PS评分、病理类型等临床特征进行分析,比较现实工作中药物对晚期NSCLC疗效的差异。生存时间应用Kaplan-Meier及Cox回归分析,Log-rank对生存曲线的差异进行显著性检验。检验水准P<0.05认为差异有统计学意义。采用SPSSl8.0统计软件进行处理。结果:1.生存的影响因素:全组的MST为10.2月,95%CI为9.3~10.9。全组患者的1年及2年生存率分别为44.2%和18.1%。接受治疗的患者MST为12.0月,95%CI为9.2~14.8;未接受治疗的患者MST为6.4月,95%CI为4.3~8.5,P
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute

respiratory distress syndrome,ARDS)是由严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病引起的破坏性大、死亡率高的急性综合征,其发病机制复杂,涉及炎症反应失控、氧化和抗氧化等多个层面,各种因素形成复杂的调控网络,因此难以寻找有效的辅助诊断指标和治疗措施。代谢组学是从代谢产物入手,对生物体的病理生理变化进行全面认识的研究方法,可望用于发现新的急性肺损伤辅助诊断指标。目前治疗ALI/ARDS唯一有效的措施是机械通气,而机械通气也会诱发和加重肺损伤,目前尚无防治机械通气所致肺损伤(ventilator-induced

不 CYT387购买 lung injury,VILI)的有效药物,因此,寻找防治VILI的有效药物并对其作用机制进行研究,也是肺损伤研究面临的一个重要的问题。 随着我国肺癌发病率与死亡率的日益升高,肺癌在呼吸系统疾病研究中所占地位越来越重要,其中,肺癌的个体化治疗是近年来的研究热点。人群对药物治疗反应的差异是由基因多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)决定的,铂类联合第三代化疗药物是治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的一线方案,但其白细胞毒性不容忽视。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在恢复造血功能方面具有重要作用,其SNPs可能是影响含铂化疗白细胞毒性的重要因素。 在本研究中,我们首次使用核磁共振氢谱(‘H nuclear magnetic resonance spectroscopy,’H NMR spectroscopy)结合模式识别技术对急性肺损伤的代谢产物进行研究,以期发现新的肺损伤辅助诊断指标；研究了中药单体姜黄素对机械通气肺损伤的保护作用及机制,以期发现新的肺损伤防治措施；探索了MMP-2SNPs与晚期NSCLC含铂化疗严重白细胞毒性的关系,以期指导肺癌的个体化治疗。 第一部分 基于核磁共振氢谱结合模式识别技术的急性肺损伤代谢组学研究目的：本研究拟利用1H NMR谱结合模式识别技术研究急性肺损伤代谢产物,并用糖皮质激素类抗炎药地塞米松(dexamethasone,DXM)进行干预,研究代谢产物变化的机制是否与肺部炎症相关。 方法：本研究将实验动物分为3组,分别为气道滴入生理盐水的假手术组(Sham组)、气道滴入5mg/kg脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)的急性肺损伤组(LPS组)以及气道滴入5mg/kgLPS同时腹腔注射5mg/kg地塞米松的地塞米松治疗组(LPS+DXM组),4小时后,通过形态学观察及肺损伤评分、肺脏湿干重比及支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)蛋白浓度检测评价是否造成急性肺损伤动物模型；通过髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、肺组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)表达检测研究炎症反应程度；通过三磷酸腺苷(adenosine

selleck化学药品 triphosphate,ATP)含量检测了解能量代谢情况,通过1H NMR谱结合模式识别技术检测和分析肺组织萃取液,研究ALI肺组织代谢产物的变化情况。结果：形态学观察及肺损伤评分结果显示LPS诱导的小鼠ALI模型以炎细胞浸润、肺血气屏障通透性增加、肺间质水肿为特征,DXM可以显著减轻上述现象；BALF蛋白浓度检测发现,LPS组BALF蛋白浓度增高,LPS+DXM组BALF蛋白浓度较LPS组下降,提示LPS诱导的ALI肺血管通透性增加可被DXM所抑制；在炎症指标的检测中发现,LPS可提高IL-1β转录和TNF-α表达水平,增强MPO活性,而DXM可以改善上述现象,提示DXM可通过其抗炎作用减轻LPS诱导的急性肺损伤；能量代谢检测显示,LPS刺激后,肺组织ATP含量下降,而DXM可以恢复ATP水平,提示ALI能量代谢失衡可能与其炎症反应增强有关,DXM可能通过其抗炎作用恢复了LPS诱导的ALI能量代谢失衡。利用1H NMR谱结合模式分析技术可以将Sham组和LPS组,以及LPS组与LPS+DXM组的样本区分开,而Sham组与LPS+DXM组的样本无法区分,进一步分析区分各组的主成分发现,肺组织中缬氨酸(valine,Val,δ1.06)、乳酸(lactate,Lac,δ1.33)、醋酸盐(acetate,Ace,δ1.91)和肌酸(creatine,Cre,δ3.93)四种代谢物浓度改变所占的权重最大,其浓度在各组中的差异具有统计学意义,而磷酸胆碱和甘油磷酸胆碱(phosphocholine and glycerophosphocholine,GPCPC,δ3.22)、肌酸酐(creatinine,Crn,δ3.07)、琥珀酸(succinatc,Suc,δ2.

41%)、右肺1 456例(52.54%)、双肺29例(1.05%);年龄16~91岁。腺癌1 622例(58.53%)、鳞癌424例(15.30%)、腺鳞癌32例(1.15%)、神经内分泌肿瘤465例(16.78%)、大细胞癌19例(0.69%)、梭形细胞癌1例(0.04%)、巨细胞癌1例(0.04%)、癌肉瘤17例(0.61%)、淋巴上皮样癌1例(0.04%)、唾液腺型肿瘤4例(0.14%)、腺瘤11例(0.40%)、间叶性肿瘤55例(1.98%)、淋巴瘤7例(0.25%)、异位起源性肿瘤13例(0.47%)、转移性肿瘤99例(3.57%)。非小细胞肺癌-非特指型,倾向于腺癌小活检中TTF-1抗体阳性率为92.60%(1

263/1 364)、Napsin A抗体阳性率为97.07%(1 324/1 364);非小细胞肺癌-非特指型,倾向于鳞癌小活检中CK5/6阳性率为96.99%(290/299)、P40阳性率为98.51%(66/67)、P63阳性率为93.72%(343/366)。非小细胞肺癌分子亚型首次活检中EGFR基因突变率34.77%(378/1 087),KRAS基因突变率2.92%(24/823),BRAF基因突变率0.87%(5/572),ALK融合基因阳性率11.99%(41/342),ALK-D5F3抗体阳性率22.23%(66/296),ROS1融合基因阳性率2.56%(7/273),c-Met基因扩增率4.40%(12/273),c-Met基因突变率6.67%(1/15),Her-2基因突变率0.73%(2/273),PIK3CA基因突变率13.33%(2/15),PTEN基因突变率6.67%(1/15),RET融合基因阳性率0(0/15)和NTRK1融合基因阳性率0(0/15)。二次活检率EGFR基因4.76%(18/378),ALK融合基因2.44%(1/41)。结论:肺肿瘤在男性患者中高发,病变部位最常见于右肺,腺癌已经成为最常见的病理类型。首次活检中非小细胞肺癌驱动基因中EGFR基因、ALK融合基因存在较高的突变率,其他基因突变率虽低但不容忽视。二次活检率较低,需引起重视。
目的探讨棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态与未经系统酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗的Ⅳ期维吾尔族非小细胞肺癌(NSCLC)患者长期生存的关系。方法收集97例未经TKIs治疗的Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者的组织标本,分别运用FISH及ARMS方法检测EML4-ALK基因融合及EGFR基因突变状态并进行生存分析。结果

Necrostatin-1核磁共振 97例Ⅳ期维吾尔族NSCLC组织中,6例(6.2%)存在EML4-ALK基因融合,26例(26.8%)存在EGFR基因突变。生存分析显示,EML4-ALK基因融合患者与EML4-ALK基因未融合患者总生存期(OS)差异无统计学意义(P=0.941),EGFR基因突变患者与EGFR野生型患者OS比较差异无统计学意义(P=0.607)。EGFR/EML4-ALK综合突变对Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者长期生存发现,EGFR突变型组、EML4-ALK阳性组、EML4-ALK阴性+EGFR野生型组患者中位OS分别为17.7、17.3、16.2个月,差异无统计学意义(P=0.915)。结论在排除TKIs治疗影响的情况下,EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变状态尚不能作为评估Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者预后的独立因素。
目的探究肿瘤相关巨噬细胞促进肝癌细胞转移的潜在分子机制。方法巨噬细胞经刺激后与肝癌细胞共培养,利用RT-PCR和流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞c-Met分子表达的影响,利用Transwell细胞迁移实验检测HGF-c-Met通路对肝癌细胞迁移能力的影响。结果 KRX-0401研究购买 Selleck Inhibitor Library THP-1来源的巨噬细胞与肝癌细胞共培养后,肝癌细胞c-Met分子在mRNA和蛋白水平的表达均有增强;与巨噬细胞共培养的肝癌细胞,在重组蛋白HGF诱导作用下,其迁移能力明显增强。结论肿瘤相关巨细胞可以上调肝癌细胞c-Met分子的表达,高表达的c-Met分子增强了肝癌细胞的迁移能力。
循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。非小细胞肺癌(NSCLC)患者血液中游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变,甲基化状态,拷贝数改变,杂合子丢失等特征,是肺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并对近年来循环游离DNA基因改变检测在NSCLC中的临床应用进行阐述。
目的探讨Ventana全自动免疫组化法检测不同标本肺腺癌间变性淋巴瘤激酶(ALK)蛋白表达的阳性率及一致性。方法收集606例肺腺癌标本,包括手术切除标本261例、小活检标本244例和胸水细胞块标本101例,采用Ventana全自动免疫组化染色仪、抗ALK兔单克隆抗体(D5F3)和超敏检测系统进行染色,检测ALK蛋白表达情况。结果

606例肺腺癌标本中,49例ALK(+),557例ALK(-),阳性率为8.1%。手术切除标本261例中20例(+),阳性率为7.7%;小活检标本244例中20例(+),阳性率为8.2%;胸水细胞块标本101例中9例(+),阳性率为8.9%;比较3种标本的ALK蛋白阳性率,差异不显著(P>0.05)。606例标本中,同一患者兼具手术标本及小活检标本46例,有2对标本ALK(+),其余标本均(-),检测结果完全一致;同一患者兼具小活检标本和胸水细胞块标本14例,小活检标本1例(+),胸水细胞块标本3例(+),2对标本检测ALK蛋白结果存在差异(14.3%,2/14)。结论 Ventana全自动免疫组化检测可以作为肺腺癌ALK蛋白阳性患者克唑替尼靶向治疗的诊断方法。手术切除标本、小活检标本和胸水细胞块标本均可作为检测ALK蛋白的样本。肺腺癌原发灶与转移灶ALK蛋白检测是否存在差异性表达,有待进一步研究。
1研发c-Met抑制剂—从苗头到先导化合物1.