明确脓毒症中是否存在组蛋白释放入血； 2.探讨组蛋白是否促进淋巴细胞凋亡及作用强度； 3.探讨组蛋白诱导淋巴细胞凋亡的机制； 4.探讨组蛋白抗体能否减轻脓毒症引起的淋巴细胞凋亡。

研究方法 1.检测脓毒症小鼠模型外周血中组蛋白H4的表达 a)动物分组 选取雄性C57小鼠18只(8-12周龄),随机分配至三大组：正常对照组,假手术组(sham组),脓毒症模型组(CLP组)。其中,正常对照组不做任何处理；sham组只打开腹腔,找到盲肠后再置入腹腔,关闭腹腔；脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术(Cecal Ligation and Puncture, CLP)。于25℃室温下观察6小时,眼球取血约1mL,至肝素抗凝管,摇匀,分离血浆和淋巴细胞,采用western blot和流式细胞技术分别检测血浆中组蛋白H4和淋巴细胞凋亡率实验重复三次。 b)脓毒症模型建立 小鼠麻醉后固定,备皮,延腹中线切开皮肤,腹白线切开腹膜,腹腔内找到盲肠,于距盲肠末端1/3处结扎,使用21G针头穿孔,盲肠置回腹腔,关闭腹腔,缝合。将术后小鼠放入室温25℃的环境下观察、麻醉苏醒。 c)外周血组蛋白H4检测 0.7mL全血离心后留取血浆,稀释5倍,加Loading Buffer变性、离心,放于-20℃保存。BCA蛋白定量检测各组总蛋白浓度,确定各组总蛋白的上样量,检测各组组蛋白H4的表达量。 d)动物淋巴细胞凋亡率检测 应用密度梯度分离法分离淋巴细胞,nnexinV-FITC/PI避光染色10min,流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率。 2.组蛋白促进淋巴细胞凋亡及其作用强度 a)细胞分组 淋巴细胞来源于健康志愿者全血,经淋巴细胞细胞分离步骤,培养于1640培养液中。(1)组蛋白诱导淋巴细胞凋亡的浓度依赖性：淋巴细胞分为4大组,每组3管,每管2.5×105个细胞,分别与组蛋白Oug/mL Pifithrin-α溶解度 有 (对照组)、50ug/mL、100ug/mL、200ug/mL于37℃培养箱中培养2h,等量1640培养基做对照。(2)组蛋白诱导淋巴细胞凋亡的时间依赖性：淋巴细胞分为3大组,每组3管,每管2.5×105个细胞,组蛋白100ug/mL,在37℃培养箱中培养0h(对照组)、2h、3h,等体积1640培养基做对照。 b)人血淋巴细胞的提取 抽取健康志愿者静脉血20mL,肝素抗凝,均分为5管,血液：PBS=1：1稀释血液,混匀后分别加入装有4m1淋巴细胞分离液的离心管上层,于25℃离心机1200g离心30min,吸取中间白膜层(富淋巴细胞),经PBS洗涤离心后,用1640培养基重悬所有淋巴细胞至同一EP管中,计数备用。c)人血淋巴细胞凋亡的检测

将处理好的淋巴细胞250g离心5min,弃上清,加入1mL PBS,重悬,离心,弃上清,AnnexinV-FITC/PI避光染色10min, PBS重悬细胞,流式细胞仪分别检测每管的淋巴细胞凋亡率。 d)动物分组 选取雄性C57小鼠20只(8-12周龄),14只用于生存时间研究,随机分配至两大组：正常对照组和组蛋白组,组蛋白组小鼠经尾静脉注射组蛋白75mg/kg,对照组尾静脉注射同等体积的PBS,观察2小时内小鼠的生存情况。6只小鼠用于淋巴细胞凋亡检测,随机分配至两组：组蛋白组和对照组,组蛋白组小鼠经尾静脉注射组蛋白60mg/kg,对照组尾静脉注射同等体积的PBS,观察6h,眼球取血0.1mL,用于淋巴细胞检测。

e)动物淋巴细胞的检测 应用密度梯度分离法分离淋巴细胞,AnnexinV-FITC/PI避光染色10min,流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率。 3.组蛋白通过作用于线粒体途径和MAPKp38诱导淋巴细胞凋亡 a)细胞分组 淋巴细胞来源于健康志愿者全血,经淋巴细胞分离后,培养于1640培养液中。(1)线粒体膜损伤检测：淋巴细胞分为5大组,每组3管,每管细胞2.5×105个,分别与组蛋白0ug/mL(对照组)、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL、200ug/mL于37℃培养箱中培养2h,等量1640培养基做对照。(2)凋亡相关蛋白检测：淋巴细胞分为3大组,每组3管,每管细胞10×105个/mL,分别与组蛋白Oug/mL(对照组)、50ug/mL、100ug/mL在37℃培养箱中培养2h,等体积1640培养基做对照。 Hormones antagonist b)人血淋巴细胞的提取 具体方法同前。 c)线粒体膜损伤检测 将处理好的细胞离心弃去上清,加入Rhodamine123染色剂0.5ug/ml,于37℃孵育0.5h,流式细胞仪检测线粒体膜损伤程度。d)线粒体膜蛋白Bcl-2检测 将处理好的细胞250g离心10min, PBS lml分别洗涤,再离心弃去上清,加入细胞裂解液,提取蛋白,变性后存储于-20℃。以GAPDH为参照蛋白行免疫印迹(western blot)检测,确定各组总蛋白量基本一致的上样量,行westernblot检测各组蛋白浓度组Bcl-2的表达。e)细胞信号通路p38活化 将处理好的细胞250g离心1(min, PBS lml分别洗涤,再离心弃去上清,加入细胞裂解液,提取蛋白,变性后存储于-20℃。以GAPDH为参照蛋白行免疫印迹(western blot)检测,确定各组总蛋白量基本一致的上样量,行westernblot检测各组蛋白浓度组磷酸化的p38的量。f) Caspase3活化检测 将处理好的细胞250g离心10mmin,PBS1ml分别洗涤,再离心弃去上清,加入细胞裂解液,提取蛋白,变性后存储于-20℃。以GAPDH为参照蛋白行免疫印迹(western blot)检测,确定各组总蛋白量基本一致的上样量,行westernblot检测各组蛋白浓度组Caspase3的活化。4.

After the discovery of targeted therapies, research has focused on the new treatment options for AGC. In the last two decades, many targeted molecules were developed against AGC. Currently, two targeted therapy molecules have been approved for patients with AGC. In 2010, trastuzumab was the first molecule shown to improve survival in patients with HER2-positive AGC as part of a first-line combination regimen.

In 2014, ramucirumab was the second targeted molecule to improve survival rates and was suggested as treatment for patients with AGC who had progressed after firstline platinum plus fluoropyrimidine with or without anthracycline chemotherapy. Ramucirumab was the first targeted therapy acting as a single agent in patients with advanced gastroesophageal cancers. Although these http://www.selleck.cn/products/Abiraterone-Acetate-CB7630.html two molecules were introduced into clinical use, many other promising molecules have been tested in phase Ⅰ-Ⅱ trials. It is obvious that in the near future many different targeted therapies will be in use for treatment of AGC. In this review, the current status of targeted therapies in the treatment of AGC and gastroesophageal junction tumors, including HER(2-3)

inhibitors, epidermal growth factor receptor inhibitors, tyrosine kinase inhibitors, antiangiogenic agents, 还有 c-MET inhibitors, mammalian target of rapamycin inhibitors, agents against other molecular pathways fibroblast growth factor, Claudins, insulin-like growth factor, heat shock proteins, and immunotherapy, will be discussed.
目的:研究蛋白激酶B(Akt)抑制剂MK-2206对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测0(空白对照)、0.5、1、2.5、5、10、20、30μmol/L Bleomycin体外 MK-2206处理A549细胞24 h后细胞的光密度;以0(空白对照)、5、10、20μmol/L MK-2206处理A549细胞24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡率,免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21、p27和细胞凋亡相关蛋白分裂的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cf-PARP)、分裂的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cf-caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bax的表达。结果:与空白对照比较,MK-2206处理后A549细胞的光密度降低;细胞缩小、呈空泡状;主要阻滞于G0/G1期,细胞中p21、p27蛋白表达增强,Cyclin

D1蛋白表达减弱;细胞凋亡率增加,细胞内cf-PARP、cf-caspase-3、Bax表达增强,Bcl-2表达减弱。各效应均呈浓度依赖性(P<0.05或P<0.01)。结论:MK-2206可抑制A549细胞增殖,并通过激活caspase-3、下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达诱导其凋亡。
Pancreatic cancer is the fourth most common cause of cancer deaths worldwide. Although recent therapeutic developments for patients with pancreatic cancer have provided survival benefits, the outcomes for patients with pancreatic cancer remain unsatisfactory. Molecularly targeted cancer therapy has advanced in the past decade with the use of a number of pathways as candidates of therapeutic targets. This review summarizes the molecular features of this refractory disease while focusing on the recent clinical and experimental findings on pancreatic cancer. It also discusses the data supporting current standard clinical outcomes, and offers conclusions that may improve the management of pancreatic cancer in the future.

AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK的影响

1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μg/ml LPS于0、5min、15min、30min及1小时收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。 2.抑制MAPK后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化 人小管细胞上皮(HK-2细胞)DMSO、PD98059、SB203580 (p38)、SP420119 (JNK). UO126(ERK)各10μmol/ml预孵2小时后,用AGE-LDL(100μg/ml)刺激6小时,收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6 mRNA。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞MAPK表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测MAPK激酶(p38、JNK、ERK)和磷酸化MAPK激酶(p-p38、p-JNK、p-ERK)的蛋白表达情况。 九.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65表达的影响 selleck 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL和10μtg/ml LPS于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 2. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-KB/p65的核转移 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)培养于置有盖玻片的6孔细胞培养板上分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激0、15min和30min。固定,封闭后,加入抗人NF-κB/p65抗体一抗过夜,用非免疫兔IgG作阴性对照,Alex488荧光标记的羊抗兔二抗避光孵育45分钟,Hochest

33258染核,树脂封片。在共聚焦显微镜下观察、拍片。 3.阻断TLR4后,AGE-LDL对人肾小管上皮细胞NF-κB表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后或者是20μtmol/L鼠抗人TLR4抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-κB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 4. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL对小管上皮细胞NF-KB表达的影响 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml selleck激酶抑制剂 AGE-LDL或10μg/ml LPS刺激15min后收集细胞。Western-blot检测NF-KB/p65和磷酸化NF-κB(p-p65)的蛋白表达情况。 5.阻断NF-κB干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA的变化肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用NF-KB/p65 siRNA 100pmol有效干扰后或者是10(imol/L NF-κB/p65抑制剂Bay11-7082预孵2小时后,分别加入100μtg/mlAGE-LDL刺激6h后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测IL-6 mRNA。 十.CD36参与AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用CD36 siRNA 100pmol有效干扰后,或者是20μmol/L鼠抗人CD36抗体预孵2小时后,分别加入100μg/ml AGE-LDL刺激6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。

十一.统计学方法 所有数据均代表3次重复实验的结果,以X±S表示。多个样本均数的比较采用One-Way ANOVA,两两比较采用LSD和SNK。实验中不同时间点之间的同一变量比较采用独立样本t检验。所有统计由统计软件SPSS13.0完成,P0.05)。 3.3 TLR4中和抗体抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6 mRNA 使用鼠抗人TLR4中和抗体,可以抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6mRNA (F= 142.096, P=0.000)。结果示10μg/ml和20μg/ml抗体预孵细胞后,可以有效的降低AGE-LDL诱导HK-2产生IL-6 mRNA水平。 3.4阻断或中和TLR4受体,可以减少AGE-LDL促进的HK-2细胞分泌IL-6 使用鼠抗人TLR4中和抗体或siRNA干扰TLR4表达,可以抑制AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6蛋白分泌(F=165.849,P=0.000) 此网站 3.5 AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的TLR4蛋白表达上没有影响(F=0.543,P=0.740) 四.Myd88/TRIF在AGE-LDL刺激HK-2细胞产生IL-6中的作用 4.1 AGE-LDL对HK-2细胞Myd88和TRIF表达的影响 本实验结果显示,AGE-LDL 100μg/ml对人肾小管上皮细胞的Myd88和TRIF蛋白表达没有影响(F=0.122,P=0.992) 4.2 Myd88和TRIF SiRNA分别抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF 使用上海吉泰生物科技公司的合成的人Myd88和TRIF siRNA,可以有效抑制HK-2细胞表达Myd88和TRIF SiRNA蛋白。 4.3 Myd88和TRIF SiRNA干扰后抑制(?)AGE-LDL促进的HK-2细胞产生IL-6 Myd88 siRNA干扰HK-2细胞后,可以有效的降低AGE-LDL和LPS诱导的HK-2所产生的IL-6 mRNA水平升高(F=l 10.374, P=0.000); TRIF siRNA干扰HK-2细胞后,对于AGE-LDL诱导的HK-2说产生IL-6 mRNA的没有明显的影响(P>0.05),而可以有效的降低LPS诱导的HK-2所产生的IL-6 mRNA水平升高(P0.05) 5.3阻断TLR4受体后,对AGE-LDL引起的HK-2细胞MAPK亚基磷酸化的影响 使用鼠抗人TLR4中和抗体或siRNA干扰TLR4表达后,可以降低AGE-LDL1001μg/ml在15min引起的HK-2细胞p38/MAPK(F=218.083,P=0.000)和JNK/MAPK磷酸化(F=67.954,P=0.000) 六.

25 nmol组可见神经元排列较稀疏,有少量锥体细胞出现形态不规则,核质浓染现象,其HG与3%DMSO+CIP+II组比较无明显差异(P>0.05),但ND略有下降(P
人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)是牙周组织的主要细胞成分,含有不同分化方向和阶段的异质性细胞群体,有合成胶原,吞噬经酶降解的陈旧胶原纤维,形成牙骨质等作用,对牙周组织起作修复和保护的作用,也是牙周组织再生的细胞学基础。 研究表明[1-3]低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound ,LIPUS)的刺激可引起细胞膜结构变化,改变K~+等离子的通透性、激活第二信使、影响细胞因子的表达,从而引起骨折愈合的链式反应;可以促进局部血流及淋巴的循环,促进生长因子等骨折愈合关键物质如细胞活素等的运输加强,刺激细胞增殖及细胞外基质合成。 p38MAPK是MAPK家族的重要成员之一,近年来研究发现p38MAPK在骨的代谢中也发挥着重要的作用。PDLCs与成骨细胞具有一定的相似性,我们推测p38MAPK可能参与了PDLCs的分化调控,同时推测p38MAPK也可能参与了LIPUS诱导的PDLCs成骨分化。 因此,本研究在p38MAPK在LIPUS诱导hPDLCs成骨分化的作用机制的探讨具有重要意义。

目的: 1、体外培养hPDLCs。 2、观察SB203580阻断干扰下,LIPUS对hPDLCs合成分泌碱性磷酸酶、骨钙素及钙盐的影响。 3、连续动态观察LIPUS对hPDLCs中p38MAPK活性的影响,为揭示LIPUS对 还有 4、观察SB203580对p38MAPK阻断干扰下,LIPUS对p38MAPK活性的影响,为揭示LIPUS对hPDLCs成骨分化的具体机制提供实验依据。

可能 方法: 1、应用组织块法进行hPDLCs的体外培养,并对其进行形态学的观察、来源鉴定、绘制细胞生长曲线。 2、取第五代人PDLCs接种于六孔板,实验组加入浓度为10μl/L p38MAPK阻断剂SB203580(溶剂为DMSO),对照组、空白组加入浓度为10μl/L DMSO,放入CO_2培养箱培养;置实验组和对照组于六通道LIPUS换能器上进行辐照,20min/d;空白组置于六通道LIPUS换能器进行20min/d、不开电源的假辐照。第11天对各组进行成骨分化期标志蛋白ALP的检测。第15天应用放射免疫法检测检测上清液中骨钙素的含量。第21天进行茜素红染色,检测钙盐的分泌情况。 3、取第五代人PDLCs,消化后接种于六孔板,接种密度为1*104个/ml,1.5ml/孔,设定实验组和对照组,每组3孔细胞,镜下见细胞汇合约60%,饥饿细胞24小时, LIPUS分别辐照0min、15 min、30 min、60 min、90 min、120 min、6h,收集需要检测的细胞,采用western-blot检测磷酸化p38 MAPK(p-p38)及总p38(p38)。4、取第五代人PDLCs,每组3孔细胞,一组加入10μl/L SB203580,另一组加入浓度为10μl/L的DMSO以排除SB203580溶剂DMSO对实验的干扰,饥饿细胞24小时,LIPUS进行辐照,辐照时间选用LIPUS连续辐照时,p-p38强度最高的时间点。收集需要检测的细胞,采用western blotting检测磷酸化p38及总p38。 结果: 1、以90

mW/cm~2、20min/d,LIPUS连续辐照11天发现,各细胞组上清液和裂解液中ALP含量有差别,且具有统计学意义(F裂解=1207,F上清=334;p0.05)。 5、以90 mW/cm~2-20min/d,LIPUS连续辐照30 min发现(时间点的选择参照2.1实验结果),加入10μl/L SB203580的实验组,p-p38灰度值低于对照组(F=2208.54,P0.05)。 SB431542核磁共振 结论: 1、以90 mW/cm~2、20min/d,LIPUS连续辐照处理0min、15 min、30 min、60 min、90 min、120 min、6h,进行总p38和p-p38检测,发现30min时p-p38灰度值达峰值。此时间参数为后续实验提供参考。 2、p38MAPK可能参与了LIPUS诱导下的hPDLCs骨向分化,但其具体的作用机制尚需进一步研究。
目的:构建重组小鼠锌α2糖蛋白(Zinc-α2-glycoprotein )真核表达载体,并稳定转染3T3-L1细胞,观察3T3-L1细胞过表达ZAG后对线粒体生物合成相关因子的影响。 方法:提取正常小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-RCR方法扩增出ZAG序列,克隆入经XbaⅠ和HindШ双酶切后的pcDNA3.1(-),重组小鼠ZAG真核表达质粒(pcDNA3.1(-)-mZAG)经转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,酶切和核苷酸测序鉴定后经脂质体转染3T3-L1细胞,G418筛选阳性克隆扩增,RT-PCR法鉴定ZAG阳性细胞株并检测过氧化物酶增殖型受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1/2(NRF-1/2)、线粒体转录因子A(mtTFA)mRNA表达,Western Blot检测PGC-1α、NRF1/2、mtTFA蛋白的表达。 结果:成功克隆小鼠ZAG cDNA全序列,并将其与pcDNA3.1(-)载体片段连接,构建成pcDNA3.1(-)-mZAG表达质粒。重组真核表达质粒经限制性核酸内切酶XbaⅠ和HindШ酶切后获得5.4kb和924bp两个片段,大小与理论值一致,并由核苷酸序列测定证实。pcDNA3.1(-)-mZAG成功转染3T3-L1细胞,在转染的3T3-L1细胞中ZAG基因的转录明显上调,过表达ZAG后,PGC-1α、NRF-1/2、mtTFA表达均上调。 结论:成功构建ZAG基因的真核表达质粒pcDNA3.

kg~(-1)麻醉。(1)8-10周龄的雄性C57 BL/6小鼠随机分为肠缺血30min、40min、50min和60min,每组8只,观察14d内肠缺血再灌注后小鼠生存率。(2)小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注处理组(Ⅱ/R):分再灌注即刻(0)、0.5h、1h、4h、6h和12h不同再灌注时间组。夹闭SMA 40min再灌注造成小鼠Ⅱ/R模型,假手术组同样进行开腹手术但不夹闭动脉。假手术后及肠缺血再灌注后不同时间相处死小鼠取小肠标本,回肠组织10%中性福尔马林液固定待病理检查,用Chiu双盲病理评分,评价肠损伤情况程度;原位末端标记(TUNEL)法对肠组织凋亡细胞进行定位检测;全细胞裂解法提取小肠总蛋白,Western blot蛋白免疫印迹法检测小肠组织JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,磷酸化JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,以及与凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平,以磷酸化MAPKs蛋白代表其活化水平。 结果:(1)肠缺血30 min小鼠生存率100%,随着肠缺血时间的增加,动物生存率逐渐降低,肠缺血60 min动物生存率仅约30%。(2)肠组织大体表现及病理评分结果均显示,肠缺血40

min后再灌注早期肠损伤严重,尤以再灌注1h肠组织病理损伤最重,至12h肠组织结构基本恢复正常;TUNEL法定位凋亡细胞结果表明,凋亡细胞分布广泛,包括黏膜、黏膜固有层,黏膜下层,甚至肌层均存在凋亡细胞,涉及细胞成分多样,以肠上皮细胞凋亡为主。肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存。(3)肠缺血再灌注早期促凋亡的活化型caspase-3蛋白表达增加,与假手术组比较,再灌注0.5h、1h小肠组织活化型caspase-3明显增加(P＜0.01),与小肠组织病理损害时相过程基本一致,同时抗凋亡Bcl-2蛋白明显下调(P＜0.01);各组间促凋亡蛋白Bax表达无统计学差异。(4)肠缺血再灌注不影响肠组织JNK、ERK、p38

Verteporfin细胞系 MAPK蛋白表达,而磷酸化JNK、ERK、p38 www.selleck.cn/products/azd9291.html MAPK蛋白表达明显增加。与假手术对照组比较,肠缺血及再灌注早期,小肠组织JNK持续活化,差异有统计学意义(P＜0.01);肠缺血再灌注导致磷酸化ERK显著增加,至再灌注4h下降至接近正常,然后ERK活化再次明显增加(P＜0.01),ERK活化呈现明显上升-下降-再上升动态活化过程;肠缺血p38 MAPK活化明显减少(P＜0.05),再灌注0.5 h肠组织磷酸化p38 MAPK急剧上升(P＜0.01),其后p38 MAPK持续活化,尽管与假手术对照组差异无显著性。 结论:肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存;肠缺血再灌注早期小肠组织JNK、p38 MAPK活化、可能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,参与了Caspase-3依赖的细胞凋亡和组织损害,ERK的活化与受损肠组织及时修复有关。对进一步研究MAPKs信号通路活化在Ⅱ/R肠损伤中的作用具有指导意义。 第二部分p38 MAPK活化在肠缺血再灌注肺损伤的作用 目的:观察小肠缺血再灌注后肺组织p38 MAPK活化规律、以及肠和肺组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1β基因转录水平的变化,探讨p38 MAPK蛋白活化在小鼠小肠缺血再灌注肠道本身及肺损伤中的作用及可能机制。 方法:为探讨肠缺血再灌注后肺组织p38 很少 MAPK活化动态过程,10周龄健康雄性C57

BL/6小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注组(Ⅱ/R):再分为肠缺血45min再灌注即刻(0)、0.5h、4h和6h。为了进一步观察p38 MAPK活化在场缺血再灌注肺损伤的可能作用,动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注对照组(Ⅰ/R)和缺血再灌注+SB239063处理组(Ⅰ/R+SB239063组),Ⅰ/R+SB239063组于术前1h腹腔注入p38 MAPK抑制剂SB239063(3 mg.kg~(-1)),另两组注入等量生理盐水。采用夹闭C57BL/6小鼠肠系膜上动脉45 min后再灌注6h的造成肠缺血再灌注损伤模型。于再灌注6h麻醉后处死小鼠,取小肠、肺标本,Western blot蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38 MAPK蛋白水平;RT-PCR法检测小肠、肺组织TNF-α、IL-1βmRNA表达;HE染色,光学显微镜观察回肠及肺组织病理学改变,分别用Chiu方法肠损伤、Gloor方法肺损伤病理评分,评价回肠及肺损伤严重程度。 结果:(1)肠缺血后再灌注导致肺组织p38 MAPK蛋白快速、持续活化,与假手术组比较,差异有显著性(P＜0.01)。(2)肠缺血再灌注引起肠道局部及肺损伤,小肠、肺组织TNF-α、IL-1β基因表达水平显著升高。(3)在肠缺血后再灌注6h,SB239063抑制肺组织p38MAPK活化,下调肺组织TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,减轻肠缺血再灌注肺损伤(P＜0.

腹脂素和ox-LDL有协同刺激内皮细胞表达ICAM-1的作用,且腹脂素水平越高(观察浓度100ng╱ml～800ng/ml),协同刺激内皮细胞表达ICAM-1的作用越强,腹脂素和ox-LDL也促进了细胞ERK_(1/2)的表达,ERK_(1/2)抑制剂PD98059能显著抑制ICAM-1的表达。 3.腹脂素和葡萄糖有协同刺激内皮细胞表达ICAM-1的作用,且腹脂素水平越高(观察浓度100ng╱ml～800ng/ml),协同刺激内皮细胞表达ICAM-1的作用越强,腹脂素和高糖也促进了细胞ERK_(1/2)的表达,ERK_(1/2)抑制剂PD98059能显著抑制ICAM-1的表达。

4.腹脂素促进内皮细胞表达ICAM-1的同时,也增强了单核细胞和内皮细胞的粘附能力。 结论 腹脂素有促进内皮细胞表达ICAM-1的作用,在ox-LDL或者葡萄糖促进内皮细胞表达ICAM-1的基础上腹脂素能进一步促进ICAM-1表达,腹脂素促进内皮细胞表达ICAM-1和其激活细胞ERK_(1╱2)信号通路有关。腹脂素促进细胞ICAM-1表达增加的同时也促进了单核细胞和内皮细胞的粘附。 第二章腹脂素对单核细胞MCP-1表达的影响 背景 在动脉粥样硬化病变的发展过程中,单核细胞表达MCP-1增加及随后的单核细胞向内皮下趋化迁移增多是促进动脉粥样硬化发展的重要因素。腹脂素是一种新发现的脂肪细胞因子,在和动脉粥样硬化病变密切相关的肥胖、糖尿病以及高血压患者体内有显著升高。已有研究发现腹脂素有促进单核细胞表达ICAM-1、内皮细胞表达VEGF的作用。腹脂素在颈动脉动脉粥样硬化斑块和冠脉斑块上有显著表达,且有症状的颈动脉粥样硬化患者腹脂素水平显著高于无症状者,这些提示腹脂素很可能和动脉粥样硬化病变发展有关。单核细胞MCP-1的表达能促进粘附于内皮细胞上的单核细胞向内皮下趋化迁移,腹脂素对单核细胞趋化因子MCP-1表达的影响尚无研究。 目的 观察腹脂素单独或者协同ox-LDL、葡萄糖对单核细胞表达MCP-1的影响,以及p38MAPK信号通道在腹脂素影响MCP-1表达中的作用。 方法 采用THP-1单核细胞株传代3-6代时处于对数生长期的细胞作为研究对象。观察细胞:(1)腹脂素(100ng╱ml～800ng╱ml)干预单核细胞24小时或者p38抑制剂SB202190预先干预细胞30分钟后再予腹脂素干预细胞24小时,细胞MCP-1表达的变化;(2)腹脂素(100ng/ml～800ng╱ml)和ox-LDL(40ug╱ml)协同刺激单核细胞24小时或者p38抑制剂SB202190预先干预细胞30分钟后再予腹脂素和ox-LDL协同刺激细胞24小时,细胞MCP-1表达的变化;(3)腹脂素(100ng╱ml～800ng╱ml)和葡萄糖(30mmol/l)协同刺激单核细胞24小时或者p38抑制剂SB202190预先干预细胞30分钟后再予腹脂素和葡萄糖协同刺激细胞24小时,细胞MCP-1表达的变化。通过检测细胞MCP-1mRNA和蛋白来观察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖对单核细胞MCP-1表达的影响,以及p38

selleck inhibitor MAPK信号途径在腹脂素影响单核细胞表达MCP-1中的作用。 结果 1.腹脂素能促进单核细胞表达MCP-1,且其水平越高(观察浓度100ng/ml～800ng╱ml),刺激单核细胞表达MCP-1的作用越强,p38抑制剂SB202190能显著抑制腹脂素促进单核细胞表达MCP-1的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有协同刺激单核细胞表达MCP-1的作用,腹脂素水平越高,其协同刺激单核细胞表达MCP-1的作用越强,p38抑制剂SB202190能显著抑制腹脂素促进单核细胞表达MCP-1的作用。 Screening Library 3.腹脂素+葡萄糖有协同刺激单核细胞表达MCP-1的作用,腹脂素水平越高,其协同刺激单核细胞表达MCP-1的作用越强,p38抑制剂SB202190能显著抑制腹脂素促进单核细胞表达MCP-1的作用。 结论 腹脂素有促进单核细胞表达MCP-1的作用,在ox-LDL或者葡萄糖促进单核细胞表达MCP-1的基础上腹脂素能进一步促进MCP-1表达,腹脂素促进单核细胞表达MCP-1和其激活细胞p38MAPK信号通路有关。 第三章腹脂素对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响背景j 动脉粥样硬化病变的发展过程中,迁移到内皮下的单核细胞转化为巨噬细胞后其表面清道夫受体CD36表达增加并促进细胞摄取ox-LDL和高级糖基化终末产物,从而促进巨噬细胞转变为泡沫细胞,加速动脉粥样硬化的进展。在巨噬细胞CD36表达的过程中PPARγ信号途径激活起着重要作用。腹脂素在颈动脉斑块和冠脉斑块上表达丰富,且有脑缺血症状的颈动脉粥样硬化患者腹脂素水平显著高于无症状者,提示腹脂素很可能和动脉粥样硬化病变的发展有关。腹脂素是否通过改变单核-巨噬细胞清道夫受体CD36的表达影响动脉粥样硬化病变进展尚不清楚。

目的 观察腹脂素单独或者协同ox-LDL、葡萄糖对单核-巨噬细胞表达清道夫受体CD36表达和细胞对胆固醇摄取的影响。 方法 将处于对数生长期的THP-1单核细胞予佛波酯诱导分化为巨噬细胞后作为研究对象。观察:(1)腹脂素(100ng╱ml～800ng╱ml)干预巨噬细胞24小时或者PPARγ抑制剂GW9662预先干预细胞30分钟后再予腹脂素干预细胞24小时,细胞CD36的表达变化;(2)腹脂素(100ng/ml～800ng╱ml)和ox-LDL(40ug╱ml)协同刺激巨噬细胞24小时或者PPARγ抑制剂GW9662预先干预细胞30分钟后再予腹脂素和ox-LDL协同刺激细胞24小时,细胞的CD36表达和细胞吞噬脂质的变化;(3)腹脂素(100ng/ml～800ng╱ml)和葡萄糖(30mmol/l)协同刺激巨噬细胞24小时或者PPARγ抑制剂GW9662预先干预细胞30分钟后再予腹脂素和高糖协同刺激细胞24小时,细胞的CD36表达变化;(4)腹脂素或者腹脂素协同ox-LDL、葡萄糖对THP-1巨噬细胞PPARγmRNA表达的影响。通过RT-PCR法检测细胞CD36和PPARγmRNA的表达水平,用western-blotting法检测细胞CD36蛋白水平,从核酸和蛋白的水平来观察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖对巨噬细胞CD36表达的影响,以及PPARγ信号途径在腹脂素影响巨噬细胞表达CD36中的作用。 Selleck PFI-2 结果 1.腹脂素能促进THP-1巨噬细胞表达CD36和PPARγ,且其水平越高(观察浓度100ng/ml～800ng╱ml),刺激THP-1巨噬细胞表达CD36和PPARγ的作用越强,PPARγ抑制剂GW9662能显著抑制腹脂素促进THP-1巨噬细胞表达CD36的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有协同刺激THP-1巨噬细胞表达CD36和PPARγ的作用,腹脂素水平越高,其协同刺激THP-1巨噬细胞表达CD36和PPARγ的作用越强,细胞吞噬的脂质量越多,THP-1巨噬细胞泡沫化现象越显著,PPARγ抑制剂GW9662能显著抑制腹脂素和ox-LDL促进THP-1巨噬细胞表达CD36和吞噬脂质的作用。 3.

02±7.61%,与25ng/ml的抵抗素诱导相比,50ng/ml及100ng/ml的抵抗素组的血小板活化率更高,具有统计学意义(P=0.028及0.036),200ng/ml的抵抗素组的血小板活化无统计学差别(P=0.077)。2)抵抗素(50ng/ml)与ADP(10uM)诱导的血小板活化率差值无统计学意义(51.74±5.2% vs 52.96±2.88%, P=0.621)。抵抗素与ADP联合作用后的血小板P-选择素的表达率比单独抵抗素或ADP作用无明显升高(55.51±3.91% vs 51.74±5.2%, 52.96±2.88%, P值分别为0.224及0.203)。3)抵抗素(50ng/ml)比凝血酶(0.05U/ml)对血小板的活化作用更强(51.74±5.2% vs 45.08±2.7%,P=0.028)。抵抗素联合凝血酶作用后血小板的活化率比凝血酶组的明显增高(45.08±2.7% vs 50.41±3.59%, P=0.02)。4)与抵抗素组(50ng/ml)比较,SB203580预处理后,抵抗素对血小板的激活率明显降低(25.22±8.34% vs 51.74±5.2%, P
背景 肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种慢性功能性肠道疾病,发病率呈上升趋势,IBS的主要特点是内脏敏感性增高,但其神经生物学机制尚不完全清楚,故对其发病机制研究有较重要意义。新近研究表明,神经胶质细胞在内脏痛反应中可能起较为重要作用,尤其是脊髓中支配左半结肠的骶髓后联合核(Dorsal

所以 commissual nucleus, DCN)中神经胶质细胞与IBS内脏高敏感性可能具有密切相关性,也成为目前研究的热点问题。 目的 本实验采用旋毛虫感染大鼠成功制作IBS大鼠模型,通过对模型大鼠的①结肠扩张刺激,观察脊髓背角中NMDAR(N-methyldaspartate receportes, NMDAR)、CGRP(Calcitoningene-related peptide, CGRP)和DCN中小胶质细胞的变化；②给予椎管内插管注射小胶质细胞上MAPK-38特异性抑制剂SB203580,观察脊髓背角中MAPK-P38、ERK以及DCN中小胶质细胞的变化,为进一步研究IBS内脏敏化的神经生物学机制提供理论依据。 方法 用旋毛虫悬液灌胃建立IBS模型,采用电生理学方法观察正常大鼠和IBS大鼠腹直肌肌电的变化；采用免疫荧光组织化学方法观察两者骶髓后角中NMDAR、CGRP、MAPK-P38、ERK以及骶髓后联合核中的小胶质细胞的表达情况。

结果 IBS结肠刺激组大鼠腹直肌肌电、大鼠骶髓后角中NMDAR、CGRP表达以及DCN中的小胶质细胞活化程度较正常大鼠及IBS未刺激组均显著增强(P<0.01)。IBS大鼠予以结肠扩张性刺激,其骶髓后角中P38、ERK表达较正常大鼠明显升高,同时OX42表达明显增高,二者相比差异显著(P<0.01),而当给予抑制剂SB203580后P38表达明显下降,同时OX42水平降低(P0.05)。 Metabolism抑制剂 结论 IBS内脏高敏感性可引起骶髓DCN中小胶质细胞的变化,其反应与小胶质细胞存在密切关系。IBS的内脏敏化可能是通过DCN中小胶质细胞的MAPK-P38信号转导途径实现的。
目的：牙周炎是人类最普遍的口腔疾病之一,它不仅是牙列缺损乃至缺失的主要原因,也是某些全身疾病如糖尿病、心血管疾病、妊娠并发症的危险因素。近一百年来,对牙周疾病的研究不断深入,其致病机理仍有诸多未解之谜,以往研究已经证实咬合创伤可参与牙周炎的发生与发展,并直接影响牙周组织的改建与修复。牙周膜成纤维细胞作为牙周膜中的主要感受性细胞和效应性细胞,在适宜的周期性应力作用下,可发生增殖、迁移、分化和凋亡,参与组织的适应性改建。本研究拟在成功构建成纤维细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,采用流式细胞术及RT-PCR等先进检测技术,从分子和基因水平探讨周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡的相关机制,初步阐明P38MAPK信号通路在周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中的作用,明确周期性张应力、细胞凋亡及P38MAPK信号通路三者的关系,为全面诠释咬合创伤的致病机理以及探寻咬合创伤干预治疗的关键靶点提供理论依据和新的思路。

方法：以体外培养的成纤维细胞为实验对象,采用多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞施加0h,6h,12h,24h周期性张应力。实验分为加力组(0h,6h,12h,24h)及加力+SB203580组(0h,6h,12h,24h)共八组。细胞所受力值大小以加力板底部硅胶膜的拉伸形变率(%)表示,拉伸形变率越大,表示成纤维细胞所受张应力越大。本实验细胞所受形变率为12%,频率为6循环/分钟,即每循环包括5秒钟牵张和5秒钟松弛。通过流式细胞术分析细胞的凋亡率,RT-PCR检测Bax蛋白的表达情况。加力之前对细胞施加P38MAPK特异性抑制剂SB203580,然后再对细胞施加相同的张应力之后再检测细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达情况。应用SPSS10.0统计软件对实验数据进行统计学分析。 结果： 1.细胞培养获得了性状稳定的成纤维细胞,并成功构建了成纤维细胞体外培养-力学刺激模型。 selleck公司 2.形变率为12%、频率为6循环/分钟的周期性张应力可诱导成纤维细胞的凋亡,成纤维细胞的凋亡率随加力时间的延长而增加,达到最高峰后开始下降,24小时内仍高于未加力组(p<0.05)；阻断p38MAPK信号通路后,凋亡基因bax的表达量降低(p
目的：翼外肌在错(?)畸形的发展及诊疗的各个阶段中起着重要作用,可以受到外环境改变的刺激而发生适应性改建。本研究在成功构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型的基础上研究P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。 方法：本实验将实验细胞分为对照组和抑制剂组。对每组细胞分别施加0小时,6小时,12小时和24小时的周期性张应力。加力设备采用多通道细胞牵张应力加载系统,加力的力值设定为15%,每分钟10循环,每循环包括3s牵张,3s松弛。应用Hoechst33258和光学显微镜检测细胞凋亡的形态学变化；RT-PCR和流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western Blot检测信号通路中P38MAPK蛋白P-P38MAPK蛋白的表达变化情况。实验结果应用SPSS17.0软件分析处理。 结果：光学显微镜可见持续张应力的作用下,骨骼肌成肌细胞发生不同程度的凋亡。Hoechst 33258检测观察到细胞受力后细胞核固缩并出现凋亡小体。RT-PCR和流式细胞术结果显示随加力时间的延长细胞凋亡率增加(P<0.

Moreover, inhibition of PI3K in P-arrestin 2-deficient mice exerts an additive effect on stress-induced lymphocyte

reduction. Our study thus demonstrates thatβ-arrestin 2 plays an important role in stress-induced immune suppression. Background:Although it is established that opioid and Mycobacterium tuberculosis are both public health problems, the mechanisms by which they affect lung functions remain elusive. Methodology/Principal Findings:We 也许 report here that mice subjected to chronic morphine administration and M. tuberculosis infection exhibited significant apoptosis in the lung in wild type mice as demonstrated by the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling assay. Morphine and M. tuberculosis significantly induced the expression of Toll-like receptor 9 (TLR9), a key mediator of innate immunity and inflammation. Interestingly, deficiency

in TLR9 significantly inhibited the morphine and M. tuberculosis induced apoptosis in the lung. In addition, chronic morphine treatment and M. tuberculosis infection enhanced the levels of cytokines (TNF-a, IL-1β, and IL-6) in wild type mice, but not in TLR9 knockout (KO) mice. The bacterial load was much lower in TLR9 KO mice compared with that in wild type mice following morphine and M. tuberculosis treatment. Morphine alone did not alter the bacterial load in either wild type SCR7小白鼠 or TLR9 KO mice. Moreover, administration of

morphine and M. tuberculosis decreased the Selleck Y 27632 levels of phosphorylation of Akt and GSK3βin the wild type mice, but not in TLR9 KO mice, suggesting an involvement of Akt/GSK3p in morphine and M. tuberculosis-mediated TLR9 signaling. Furthermore, administration of morphine and M. tuberculosis caused a dramatic decrease in Bcl-2 level but increase in Bax level in wild type mice, but not in TLR9 KO mice, indicating a role of Bcl-2 family in TLR9-mediated apoptosis in the lung following morphine and M. tuberculosis administration. Conclusions/Significance:These data reveal a role for TLR9 in the immune response to opioids during M. tuberculosis infection. Opioids have been widely applied in clinics as one of the most potent pain relievers for centuries, but their abuse has deleterious physiological effects beyond addiction. We previously reported that opioids inhibit cell growth and trigger apoptosis in lymphocytes. However, the underlying mechanism by which microglia apoptosis in response to opioids is not yet known. In this study, we show that morphine induces microglia apoptosis and caspase-3 activation in an opioid-receptor dependent manner. Morphine decreased the levels of microglia phosphorylated Akt (p-Akt) and p-GSK-3β(glycogen synthase kinase 3 beta) in an opioid receptor dependent manner.

MG-63及U20S细胞分别培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基及McCoy’s 5a Medium Modified培养基中,将MG-63及U20S细胞放于37℃,5%CO2的培养箱中培养。当细胞生长至90%融合时进行传代,根据实验需要给予相应的干预； 2.上述传代培养的细胞,应用CCK-8法检测BBR对MG-63、U2OS细胞增殖的影响；

PLX4032核磁共振 3.上述传代培养的细胞,应用流式细胞仪检测BBR对MG-63、U2OS细胞凋亡的影响； 4.上述传代培养的细胞,将p38MAPK及JNK的抑制剂SB203580及SP600125与MG-63、U2OS细胞及BBR共同孵育24 h后,应用流式细胞仪检测BBR对MG-63、U2OS细胞凋亡的影响； 5.上述传代培养的细胞,随机分为Control组,DMSO组,10ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100 ug/mlBBR组,每组设5复孔。分别将溶媒DMSO, 10ug/ml BBR,50 ug/mlBBR,100 ug/mlBBR加入相应的孔中,孵育24 h后按照caspase-3活性试剂盒说明书方法检测MG-63、U2OS细胞的caspase-3活性； 6.BBR干预MG-63、U20S细胞24 h后,收集细胞并提取细胞蛋白质,应用Western-blotting方法检测MG-63、U2OS细胞中Bcl-2、Bax (?)勺表达。 实验结果： 1.BBR呈时间与剂量依赖性抑制MG-63、U2OS细胞增殖。 2.BBR诱导MG-63、U2OS细胞发生凋亡,p38MAPK抑制剂SB203580与JNK抑制剂SP600125显著抑制BBR诱导的MG-63、U2OS细胞凋亡。结果显示,对照组,溶媒组,10 ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100 ug/mlBBR组MG-63细胞凋亡的比例分别为(3.570±0.661)%,(5.820±0.456)%,(7.930±0.511)%,(13.630±1.352)%和(22.187±1.962)%；对照组,溶媒组,10ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100ug/mlBBR组U20S细胞凋亡的比例分别为(4.083±1.301)%,(7.803±0.626)%,(10.630±0.534)%,(17.470±1.984)%和(27.660±2.088)%。三种BBR组细胞凋亡的比例与溶媒组的差异具有统计学意义(P
第一章氟非尼酮对肾小管上皮细胞炎症反应的影响及作用机制研究 研究背景：肾纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾病的共同通路和主要病理基础。无论何种病因导致的慢性肾脏疾病,随着慢性肾脏疾病的进展往往会导致广泛的组织纤维化、肾实质完全破坏和肾功能衰竭。因此,攻克肾脏纤维化一直是慢性肾衰竭防治中最为关键的科学问题。抗肾纤维化新药AKF-PD是本课题组设计的小分子化合物。目前已证实AKF-PD对肾纤维化实验动物模型有良好的抗纤维化疗效。但AKF-PD治疗肾间质纤维化的具体机制尚未完全阐明。目前的研究结果显示AKF-PD(?)(?)抑制(?)NADPH氧化酶的表达和减少活性氧的产生,抑制肾小管细胞凋亡、转分化及成纤维细胞的增殖,下调致纤维化细胞因子的表达,减少病变肾脏基质胶原合成。研究表明炎症反应是肾脏纤维化发病进程中的早期事件,对肾纤维化的发病具有重要作用。但AKF-PD对肾脏局部细胞炎症反应的影响及其作用机制尚不清楚。肾纤维化是个复杂的病理生理过程,需要多种细胞的参与及相互作用,包括肾固有细胞及募集的炎症细胞。肾脏受到多种致肾损伤因子作用后,一方面非致死受损的肾固有细胞本身发生活化、增殖,分泌大量炎症／趋化因子,加重肾损伤；另一方面致死性受损的肾固有细胞发生坏死、凋亡,细胞死亡后作为抗原激活临近炎症细胞,促进炎性细胞分泌炎症因子/趋化因子,扩大炎症反应,进一步加重肾损伤。

Rapamycin 价格 肾小管上皮细胞是兼有免疫调节作用且生物学功能十分活跃的细胞。作为肾固有细胞的主要组成部分,其在肾脏疾病局部微环境形成及调控中发挥重要作用。研究报道促炎因子TNF-a在肾间质纤维化中表达增加,增加的TNF-a可以加重炎症反应及肾损伤。 目的：观察AKF-PD对促炎因子TNF-a诱导HK-2细胞炎症因子及趋化因子表达的影响；进一步探讨AKF-PD对TNF-a诱导HK-2细胞MAPK及NF-κB信号通路的调节作用。 寻找更多 方法：将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+DEX组,分别用2mM AKF-PD、1μMDEX预处理HK-2细胞1小时后,加入TNF-a (lOng/ml)继续培养24小时,收细胞上清,用ELISA方法观察AKF-PD对TNF-α刺激的HK-2细胞IL-6、IL-8及MCP-1的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-a刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+MAPKs抑制剂组,分别用2mM AKF-PD预处理HK-2细胞24小时,10pM MAPKs特异性抑制剂(PD98058、SB203580、SP600125)处理HK-2细胞1小时后,加入10ng/ml TNF-a继续培养15分钟,提细胞蛋白,用Western Blot方法检测AKF-PD对p-ERK1/2,p-p38和p-JNK表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+NF-κB抑制剂组,分别用2mM AKF-P D预处理HK-2细胞24小时,10μM NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082处理HK-2细胞1小时后,加入10ng/ml TNF-α继续培养60分钟,提细胞蛋白,用WesternBlot方法检测AKF-PD对细胞内p-IκBα表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-α+AKF-PD组,用2mM AKF-PD预处理HK-2细胞24小时后,加入10ng/ml TNF-α继续培养60分钟,提取细胞核蛋白,用Western Blot方法检测AKF-PD对细胞核内P65表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-α+AKF-PD组,TNF-α+DEX组,分别用2mM AKF-PD、1μM DEX预处理HK-2细胞24小时后,加入TNF-α (lOng/ml)继续培养60分钟,采用双荧光素酶报告分析系统检测AKF-PD对TNF-α刺激的HK-2细胞NF-κB报告基因转录活性的影响。 结果：TNF-α刺激HK-2细胞24小时后,细胞上清中IL-6、IL-8及MCP-1的分泌量明显高于正常组(p<0.05)；TNF-α刺激HK-2细胞15分钟后,p-p38的表达显著上升,AKF-PD和p-p38特异性抑制剂SB203580均能有效降低p38的磷酸化(p<0.

0μg／ml、6小时／天，连续12天)。干预组雾化吸入丙烯醛同时分别给予罗格列酮2mg／kg、4mg／kg、8mg／kg管喂。提取支气管肺组织，采用HE染色及AB-PAS染色方法了解支气管肺组织的病理改变和气道杯状细胞增生情况；收集支气管肺泡灌洗液，采用ELISA法检测BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平；应用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学法及Western selleck产品 blot方法检测气道粘蛋白Muc5ac、PPARγ及NF-κB、I-κB等的表达水平。 结果丙烯醛刺激导致大鼠气道上皮Muc5ac mRNA和蛋白表达增高，支气管肺泡灌洗液中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平增高，同时气道上皮细胞NF-κB表达和NF-κB入核率增加，I-κB表达下降。相关性分析显示气道上皮细胞NF-κB的活化、BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平与Muc5ac

mRNA表达分别呈正相关。罗格列酮能上调PPARγmRNA和PPARγ蛋白的表达，并以浓度依赖性方式抑制丙烯醛所致的气道上皮Muc5ac表达增高，下调BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平，同时抑制气道NF-κB的活化及I-κB的降解。相关性分析显示气道PPARγ表达与气道NF-κB的活化、BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平及Muc5ac mRNA表达分别呈负相关。 结论丙烯醛致气道炎症和黏液高分泌过程与NF-κB的活化有关；PPARγ及其配体可以抑制丙烯醛诱导的气道炎症反应和气道黏液高分泌，其具体机制可能是通过抑制NF-κB的活化、中性粒细胞聚集和抑制炎性细胞因子的释放而发挥作用。
血流脉动的张应变在血管重建过程中起重要作用。周期性张应变加载至少包含3种信息:应变幅度、作用时间以及应变频率。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)在血管中的规则有序排列对于维持血管形态功能及力学特性非常重要。机械应力大小可以影响体外培养的VSMCs排列,但周期性张应变频率在调控VSMCs排列中的作用及其机制目前仍不清楚。 本文应用FX-4000T细胞张应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMCs施加不同频率相同幅度的周期性张应变,以0 Hz,即无加载频率、持续加载相同幅度张应变的VSMCs为对照组。通过图像分析测定细胞朝向角度,引入角信息熵(angle 也许 information entropy, AIE)评价细胞排列的规则程度;采用Logistic曲线方程对角度及熵值进行数值拟合与实验验证;通过realtime RT-PCR及western blotting及流式细胞技术检测VSMCs的integrin-β1、p38表达以及F/G actin比例;采用特异抑制剂阻断相应信号调节分子的活性或表达,研究了不同频率张应变在调控VSMCs排列中的作用及其机制。 结果显示:①不同频率张应变作用下VSMCs的有序排列程度明显不同。在一定时间内,1.25

Hz的张应变更能促进VSMCs有序排列,经过足够时间的周期性牵张后,较低频率可使VSMCs更有序排列;②张应变可以频率依赖地激活VSMCs的integrin-β1、Rac及p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度;③阻断信号分子Integrin-β1、p38以及破坏细胞骨架微丝系统可以显著影响不同频率张应变诱导的VSMCs朝向改变过程;④破坏细胞骨架微丝系统可使不同频率张应变作用下的integrin-β1活化受到抑制,阻断integrin-β1也可抑制p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度。 Fulvestrant分子量 上述结果表明,周期性张应变频率是VSMCs排列的重要调控因素,在一定范围内VSMCs排列应有其最敏感适频率。Outside-in及inside-out信号途径都参与了不同频率张应变调控VSMCs排列的信号转导过程,完整的细胞骨架微丝系统可能是感受应变频率信号的关键结构。周期性张应变频率调控体外培养的VSMCs排列的规律,有助于解释一些临床现象并对血管组织工程的细胞种植调控有重要参考价值。
目的 1观察钙调蛋白抑制剂N-(6-氨基己烷基)-5-氯-1萘-黄胺(W-7)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartate,NMDA)诱导的体外培养的乳鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及机制。

2观察钙调蛋白抑制剂W-7对戊四唑(Pentylenetetrazol,PTZ)诱导的癫痫大鼠模型的保护作用及机制。 方法 第一部分取原代培养7天的乳鼠大脑皮质神经元随机分为5组:(1)正常对照组:仅用杜氏改良低糖型F12培养基(Dilbecco’s modified eagle medium/F12,DMEM/F12)完全培养基。(2)NMDA损伤组:去除正常神经元培养液,加入NMDA 50μmol/L,处理时间10min。(3)3个剂量的W-7保护组:分别为保护组-1:25μmol/L,保护组-2:50μmol/L,保护组-3:100μmol/L,先加入W-7,培养24h后加入NMDA 50μmol/L。MTT法检测细胞存活力;在荧光显微镜下观察皮质神经元的形态;丫啶橙染色检测凋亡细胞数量;检测培养上清液中乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)含量;用免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内核转录因子κB(Nuclear factorkappa B,NF-κB)p65、p38半胱氨酸基天冬氨酸(Cysteiyl aspartate specificproteinase,MAPK)蛋白的表达。 第二部分健康SD大鼠38只,随机分为5组,对照组(腹腔注射生理盐水)、PTZ组(腹腔注射PTZ)和三个剂量的W-7组(腹腔注射PTZ和W-7)。观察行为学表现;脑组织中LDH含量测定;HE染色观察神经元的形态学改变;免疫组织化学方法和免疫印记方法检测海马组织NF-κBp65、p38MAPK和半胱氨酸基天冬氨酸(Cysteiyl aspartate specific proteinase,caspase)-3蛋白表达的变化。 结果 第一部分(1)同对照组比较,NMDA损伤组神经元凋亡增加(P＜0.01),W-7组减少,呈剂量依赖性(P＜0.05)。(2)NMDA组培养上清液中LDH含量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);W-7干预组LDH含量低于NMDA组,差异均有显著性意义(P＜0.