01)、SCr显著升高(P<0.05)。②肾脏病理显示三个对照组(NCG、LCG和SCG)小鼠肾脏结构无明显异常,但两个环孢素模型组小鼠肾小管结构不同程度损伤,间质炎性细胞增多,蓝色胶原染色不同程度增多,CMG组小鼠肾脏病变尤其明显。③三个对照组肾脏Hyp水平无明显差异,但两个环孢素模型组肾组织Hyp水平明显增多(P<0.01),IMG组Hyp低于CMG组(P<0.01),突出表达于小管间质,IMG组上述因子免疫着染程度低于CMG组(尸<0.01),ILK表达上调低于CMG组(P<0.01),但IMG组ILK表达上调低于CMG组(P
目的随着对基质金属蛋白酶越来越深入的认识,其在心肌梗死后心室肌重塑和恶性心律失常中所起的作用越来越引起重视。基质金属蛋白酶抑制剂有望成为治疗和预防心肌梗死后心室肌重塑和恶性心律失常的新方法,多西环素作为一种广谱的基质金属蛋白酶抑制剂,因其毒性小、半衰期长的特点在研究中广泛采用。本实验观察多西环素对缺氧大鼠H9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43表达的影响,探讨其可能的作用机制,为冠心病的治疗提供理论依据。

所以 方法采用高糖、含10%FBS的DMEM,于5%CO2培养箱37℃培养大鼠H9c2心肌细胞,用MTT法检测多西环素对大鼠H9c2心肌细胞存活率的影响。当细胞处于对数期长满80%左右时,换用低糖、不含FBS的DMEM,于含95%N2和5%CO2培养箱37℃分别缺氧处理6h、12h、24h,采用Western Blotting法检测缺氧处理6h、12h、24h后心肌细胞Cx43总蛋白的表达量,以及用基质金属酶抑制剂(多西环素10μg/ml)、P13K抑制剂(LY29400230μm/L)、ERK1/2抑制剂(U012610μm/L)分别干预缺氧H9c2心肌细胞6h、12h、24h后Cx43总蛋白表达量的变化。 此网站 结果1.用MTT法检测多西环素对大鼠H9c2心肌细胞生长的影响,结果表明,10μg/ml以下浓度的多西环素对心肌细胞生长影响不明显,而10μg/ml以上多西环素则明显抑制心肌细胞生长,且随着时间延长,该作用明显增强,呈时间、剂量依赖关系。

2.缺氧组较空白对照组Cx43总蛋白表达量明显降低(P<0.01)。缺氧6h时,多西环素干预组和U0126干预组较缺氧组Cx43总蛋白表达量明显增高(P<0.05),缺氧12h时,多西环素干预后Cx43总蛋白表达量与缺氧组比较无明显差异,U0126干预组Cx43总蛋白表达量仍较缺氧组增高(P<0.05),缺氧24h时,多西环素和U0126干预后Cx43总蛋白表达量与缺氧组比较无明显差异。LY294002干预组在观察时间范围内均较缺氧组Cx43总蛋白表达量显著降低(P
目的：探讨缺氧预处理对猪缺氧复氧冠状动脉内皮源性超极化因子(EDHF)介导的内皮舒张功能的影响及其机制。 方法：随机选取新鲜猪心9个,每只取其心外膜下冠状动脉前降支中下1/3切成4段,长2m,随机置入如下4组的环境中。对照组：冠状动脉血管环未经过缺氧/复氧处理及缺氧预处理,直接在37℃有氧条件下用KH液孵育60mmin,再平衡30min；实验组A：在4℃条件下用KH液缺氧浸泡60min后复氧30min,再按对照组的方法进行处理；实验组B：在4℃条件下用KH液缺氧浸泡5min后复氧10min,再按实验组A的方法进行处理；实验组C：在37℃有氧条件下含5-羟基癸酸甘油酯(10μmol/L)的溶液浸泡25min,再按实验组B的方法进行处理。然后采用器官槽法检测血管环在消炎痛(7μmol/L)、N-硝基-L-精氨酸(300μ/L)及氧合血红蛋白(20μmol/L)作用下,前列腺素F2α引发的血管收缩反应,及不同缓激肽浓度下EDHF引发的血管舒张反应。

结果：与对照组相比,内皮源性超极化因子引发的血管环最大舒张反应变化,实验组A、C均明显降低(P0.05)。 结论：①缺氧复氧对冠状动脉内皮源性超极化因子所介导的内皮依赖性舒张功能有损害作用；②缺氧预处理对冠状动脉内皮源性超极化因子所介导的内皮依赖性舒张功能有保护作用；③缺氧预处理能选择性开放线粒体ATP敏感的钾离子通道(mitochondria http://www.selleckchem.cn/products/INCB18424.html ATP-sensitive K+channel, mKATP)可能是这一保护作用的主要原因。
目的：探讨肾缺血再灌注损伤的细胞信号转导机制和α-硫辛酸(LA)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组：①假手术组(Sham组)；②缺血再灌注组(I/R组)：夹闭双侧肾蒂,45min后去夹再灌,制备缺血再灌注模型；③I/R+低剂量α-硫辛酸组(LA-L组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA10mg/kg；④I/R+中剂量α-硫辛酸组(LA-M组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA50mg/kg；⑤I/R+高剂量α-硫辛酸组(LA-H组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA100mg/kg；再灌注24h后分别取血及肾组织。检测血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾脏病理改变；测定血清丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性；免疫组化、PT-PCR检测肾小管上皮细胞JNK、c-jun、ATF-2磷酸化蛋白及mRNA的表达水平。 结果：与Sham组比,I/R组大鼠血Cr和BUN水平明显升高(P
目的：作为泌尿系统最常见的恶性肿,瘤,膀胱癌在其发生、发展以及复发过程中逃避机体免疫监督的诸多生物学行为正日益受到广泛关注。研究表明Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)在多种恶性肿瘤中存在表达并与某些肿瘤的分期分级密切相关,提示TLR4可能参与了肿瘤的免疫逃逸过程；而共刺激因子B7H1可与T淋巴细胞表面的PD-l结合并启动后者的凋亡过程,是免疫逃逸过程的重要分子。本研究的主要目的即探讨LPS介导的TLR4信号通路的活化与B7-H1表达的关系,并探讨他们参与膀胱癌免疫逃逸可能的分子机制。 方法：1.体外培养膀胱癌T24细胞系,分别以不同浓度的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)(0.0.25、0.5、0.75、1.0、2.0μg/ml)刺激T24细胞8h,以激活TLR4信号通路。用流式细胞学方法检测T24细胞表面TLR4的表达情况；分别提取总RNA,用逆转录聚合链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)技术检测共刺激因子B7H1mRNA的表达情况；提取蛋白质,用Western-blot蛋白印迹技术检测B7H1蛋白质的表达情况； 2.以浓度1μg/ml的LPS分别刺激T24细胞不同时间(Oh、2h、4h、6h、8h、12h),以激活TLR4信号通路。用前述方法分别检测检测TLR4、 B7H1mRNA、B7H1蛋白质的表达情况； 3.

Moreover,in the era of individualized treatment for most of the other cancer types,identification of special subgroups comprising those who will derive more or no benefit from adjuvant therapy merits further investigation.The aim of this review is to reveal the historical evolution and future reflections of adjuvant treatment modalities for resected gastric cancer patients.
肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,随着我国工业化速度的加快和吸烟率的增加,肺癌的发病率迅猛增长,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占75%~80%,大多数患者就诊时已为进展期[1],确诊时分期为Ⅳ期者约为30%~40%,且非Ⅳ期患者在治疗过程中也有相当一部分会出现远处转移演变成Ⅳ期,自然生存期仅3个月左右[2]。
Precision medicine aims to identify the right

drug, selleck抑制剂 for the right patient, at the right dose, at the right time, which is particularly important in cancer therapy. Problems such as the variability of treatment response and resistance to medication have been longstanding challenges in oncology, especially for development of new medications. Solid tumors, unlike hematologic malignancies or brain tumors, are remarkably diverse in their cellular origins and developmental timing. The ability

of next-generation sequencing(NGS) to analyze the comprehensive landscape of genetic alterations brings promises to diseases that have a highly complex and heterogeneous genetic composition such as cancer. Here we provide AZD5363研究购买 an overview of how NGS is able to facilitate precision medicine and change the paradigm Obeticholic Acid体内 of cancer therapy, especially for solid tumors, through technical advancements, molecular

diagnosis, response monitoring and clinical trials.
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因突变情况与临床特征、生存时间的关系。方法回顾性分析82例NSCLC患者的临床资料,包括患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤转移、临床分期或术后分期及表皮生长因子受体(EGFR)突变情况等,并通过阅览病例、电话随访等方式随访其生存情况。结果 82例中,检测出EML4-ALK融合基因突变9例为突变阳性组,总突变率为10.98%,余为突变阴性组。2组在性别、肿瘤病理类型、肿瘤转移、病理分期等方面比较,差别无统计学意义(P>0.05);2组在吸烟史、EGFR基因突变情况的比较,差别有统计学意义(P<0.05)。突变阳性组与突变阴性组的中位生存期分别为21月(95%CI,18~24月)和23月(95%CI,22~24月),差别无统计学意义(P
大数据时代,超级计算机促进了合理药物设计研发,这种药物研究模式的转变推动了创新新药发现又一个春天的到来。科研信息化基础设施的升级,包括高性能计算机处理器技术的不断更新,新的资源模式的出现,使得超算技术与计算生物学、计算化学密切结合,进一步为传统的药物发现和计算机辅助药物设计增添了新功能,加速了分子动力学模拟和虚拟筛选等的研究进程。文章从药物设计学方法研究、药代动力学模型设计和药物设计方法的具体应用三个方面对当今合理药物设计领域的新发展进行了评述,详尽阐释了科研信息化在提高效率、降低成本、加快进程、管控风险及提升研发价值和创新能力方面的优势。
味觉改变又称味觉障碍,是指味觉反常或味觉受损,或是一种不愉快的味觉变化~([1]),是肿瘤化疗常见不良反应之一。因肿瘤类型和所在部位的不同,使用的化疗药物种类及方案不同,肿瘤患者化疗相关性味觉改变的发生率为38%~84%~([2])。由于味觉改变并不严重威胁患者生命,往往不被医护人员重视,但
目的:检测ALK基因在HBs Ag阳性肝细胞癌患者中的表达,并分析其与临床特征及预后的相关性。方法:收集我院2005~2010年261例术后经病理确诊的HBs Ag阳性肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法和FISH法对标本石蜡切片进行分析,检测ALK表达情况,并探讨其对HBs Ag阳性肝癌患者临床病理因素和预后的影响。结果:在肿瘤组织中,免疫组织化学法和FISH法分别检测到ALK阳性表达率为44.8%和32.6%。免疫组化结果进一步显示ALK蛋白表达与患者性别、肿瘤数目和微转移密切相关(P<0.

7巨噬细胞表面受体CD14、胞内信号转导分子p38 MAPK、iNOS及炎症介质TNF-α、NO表达的动态变化,探讨槐定碱抗内毒素性炎症反应的机制。 方法用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,建立细胞炎症反应模型,实验细胞分为8组(n = 6):空白对照组、LPS模型1组、LPS模型2组、槐定碱干预组、槐定碱预处理组、槐定碱预混合组、SB203580组、SB203580

+槐定碱干预组。槐定碱剂量15.63 mg·L~(-1)。MTT法测定槐定碱最大无毒浓度(TC0);反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p38及iNOS mRNA表达;Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p-p38及iNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法测定细胞培养液一氧化氮(NO)含量;放射免疫分析法检测细胞培养液肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。 Caspase inhibitor 结果( 1)Reed Muench法计算槐定碱对RAW264.7巨噬细胞的TC0=200 mg·L~(-1)。(2)与空白对照组比较,LPS模型1组各时间点CD14、p38、iNOS mRNA与CD14、p-p38、iNOS蛋白表达均显著增高(P<0.01或P<0.05),但仍高于空白对照组(P<0.05或P<0.05或P<0.01或P<0.05),但仍高于空白对照组(P<0.01或P<0.05),但均高于空白对照组(P<0.01);与LPS1组比较,槐定碱干预组各时间点NO、TNF-α释放量均低于同时间点LPS1组(P<0.05或P0.05); SB203580组各时间点NO、TNF-α释放量均低于同时间点LPS1组(P<0.05或P<0.01);SB203580+槐定碱干预组NO、TNF-α释放量多低于同时间点SB203580组(P<0.05或P0.05),表明槐定碱干预LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO、TNF-α具有时间依赖性。 (5)与LPS1组比较,槐定碱31.25 mg·L~(-1)、15.63 mg·L~(-1)剂量干预组均可下调NO、TNF-α释放量(P<0.05或P0.05);SB203580组NO、TNF-α释放量均低于LPS1组(P<0.05或P0.05);表明槐定碱干预LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO、TNF-α具有剂量依赖性。 GDC-0199购买 结论(1)Reed Meuench法计算槐定碱对RAW264.7巨噬细胞的TC0= 200mg·L~(-1)。 (2)槐定碱抗内毒素效应与其下调LPS诱导的CD14、p38、iNOS的转录、翻译及蛋白磷酸化水平及直接拮抗内毒素作用有关。

(3)槐定碱抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞释放NO、TNF-α的效应具有时间依赖性和剂量依赖性。 (4)槐定碱可协同SB203580抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS的表达及NO、TNF-α的释放,表明槐定碱还可通过干预p38 MAPK途径外的其它信号通路抑制LPS诱导的炎症因子表达。
目的：赭曲霉毒素A（OchratoxinA, OTA）是由曲霉菌属和青霉菌属的某些菌株产生的一种真菌毒素，其污染非常普遍，在粮食作物和食品中存在非常广泛。OTA的主要毒性作用器官是肾脏，OTA可能是巴尔干地方性肾病的主要致病原，1993年国际癌症研究中心IARC将OTA列为“可能的人类致癌物”。除外肾毒性，动物实验研究还发现OTA具有免疫毒性、肝毒性、神经毒性、致突变性、致畸性和致癌性等生物效应。长期食用OTA污染的饲料，可以诱发F344/N大鼠出现前胃上皮细胞增生和乳腺纤维腺瘤。由于在食物中分布的广泛性，人类很容易长期暴露于OTA的毒性环境中。 研究表明一些真菌毒素的早期毒性作用是通过引起凋亡、增殖抑制或者周期阻滞，比如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮及烟曲霉毒素B1。我们实验室前期研究工作发现，OTA通过下调人胃黏膜上皮细胞周期调控关键蛋白（Cdc25C、Cdc2和CyclinB1）的表达引起细胞G2期阻滞，提示OTA可通过G2期阻滞来发挥其部分毒性作用，在中国仓鼠肺成纤维细胞（V79）及非洲绿猴肾脏细胞（CV-1）中，OTA也通过导致G2期阻滞来发挥其毒性作用。

丝裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）级联是细胞内重要的信号转导系统之一，参与细胞的各种生理及病理活动，包括细胞增殖、分化和凋亡。MAPKs家族最主要的成员为ERK（细胞外信号调节激酶）通路，JNK/SAPK（c-Jun氨基末端激酶/应激活化蛋白激酶）通路和p38MAPK通路。研究表明在各种刺激因素的作用下，细胞可以通过激活或抑制MAPK信号通路而启动细胞G2期检测点，使细胞发生G2期阻滞。Yang等人发现脱氧雪腐镰刀菌烯醇介导的G2/M阻滞是通过ERK1/2信号通路增强p_21水平实现的。然而，目前有关OTA诱导人胃黏膜上皮细胞G2阻滞的相关分子机制尚不明了。 此网站 鉴于MAPK信号通路在细胞周期中的重要作用，我们提出这样的假设，即MAPK信号通路可能参与OTA诱导的人胃黏膜上皮细胞G2期阻滞。为验证本假设，本实验将观察JNK、ERK和p38MAPK信号通路在OTA诱导的G2期阻滞中的作用，以期揭示OTA诱导体外人胃黏膜上皮细胞G2期阻滞的可能分子机制。 方法： 1细胞培养与处理 正常人胃黏膜上皮细胞（GES-1）培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的DMEM培养基中，37℃、5%CO2培养，细胞贴壁生长。 选择对数生长期的细胞（传代后24h）随机分为溶剂对照组和实验组。实验组给予OTA，使其终浓度分别为5、10、20μM，溶剂对照组给予终浓度为0.

05），且促炎因子对ADAMTS-4mRNA的诱导作用具有剂量依赖性（p<0.05）。促炎因子可以提高ADAMTS-4启动子的活性（p<0.05）。使用DN-p38α，DN-pβ2，DN-p38γ及DN-ERK1共转染后，促炎因子对ADAMTS-4启动子活性的诱导作用被抑制（p0.05）。使用过表达p65/RelA质粒转染髓核细胞后，ADAMTS-4启动子活性升高（p0.05）；使用过表达p65/RelA和/或p50质粒转染髓核细胞后，只有p65/RelA可以提高ADAMTS-4启动子活性，p50对ADAMTS-4启动子活性没有作用（p>0.05）。p50可以完全抑制p65对ADAMTS-4启动子活性的诱导作用（p<0.05）,此外，p50还可以抑制促炎因子TNF-α及IL-1β对ADAMTS-4启动子活性的诱导作用（p<0.05）。使用NFβB通路抑制剂SM7368处理髓核细胞后，促炎因子对ADAMTS-4启动子活性的诱导作用被完全抑制（p0.05）。

结论：1. ADAMTS-4在成熟大鼠髓核组织及纤维环组织中均有表达，在生理状态下，ADAMTS-4在大鼠椎间盘组织中的表达水平很低。2.促炎因子TNF-和IL-1在mRNA以及蛋白水平对ADAMTS-4的表达均有正调节作用，且这种调节作用具有剂量依赖性。3.促炎因子TNF-和IL-1在转录水平对ADAMTS-4启动子活性具有诱导作用。4. 一般 TNFα和IL-1β对ADAMTS-4表达的调节是通过激活MAPK及NF B信号通路起作用的，MAPK传导通路对ADAMTS-4表达的调节具有亚型特异性的特点； NFκB传导通路对ADAMTS-4表达调节的作用靶点主要为p65亚基，p50则能够抑制促炎因子及p65对ADAMTS-4启动子活性的诱导作用。 第二部分：ADAMTS-4在椎间盘退变中的作用及机制研究 研究背景:腰痛(Low Back Pain)是一种可由多种疾病如腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄症、腰椎滑脱症及退变性腰椎侧弯症等导致的与椎间盘退变(Intervertebral DiscDegeneration, IVDD)密切相关的极为常见的临床疾病，目前公认椎间盘退变主要是由细胞外基质如蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的合成代谢与分解代谢的不平衡造成的，具体表现为：蛋白聚糖(以聚集蛋白聚糖Aggrecan为主)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)等基质大分子的减少及椎间盘髓核细胞数量减少和功能降低，最终导致椎间盘应力改变和椎间高度丢失从而造成椎间盘的生物力学功能丧失。尽管人们已经越来越意识到蛋白聚糖的合成及分泌在椎间盘功能中的重要性，无论在正常椎间盘还是退变椎间盘中，调节蛋白聚糖降解的分子机制还没有研究清楚。相关研究结果表明：在椎间盘退变及突出的过程中，髓核细胞分泌了大量的促炎症因子如TNF-α和IL-1β，而在髓核细胞中这两种炎症因子还可以上调两种主要的蛋白聚糖酶(ADAMTS-4和ADAMTS-5)的表达。在ADAMTS家族的众多成员中，目前普遍认为ADAMTS-4和ADAMTS-5最有可能在蛋白聚糖降解及随之而来的骨性关节炎中及椎间盘退变的过程中起到重要作用。值得注意的是，尽管ADAMTS-4和ADAMTS-5在骨关节炎及椎间盘退变性疾病中具有很重要的意义，关于ADAMTS-4和ADAMTS-5在椎间盘退变中的具体作用机理及二者在椎间盘退变中的相对贡献目前尚无明确报道。因而，进一步深入探讨并阐明ADAMTS-4和ADAMTS-5在椎间盘退变过程中的作用及具体机制，为下一步延缓乃至阻止椎间盘退变提供可能的分子生物学治疗依据具有重要的意义。

目的：研究NF-κB信号通路在椎间盘退变中的作用机理，探讨ADAMTS-4和ADAMTS-5在椎间盘退变中的作用及相对贡献，为下一步针对椎间盘退变的靶向治疗提供分子生物学依据。 哪里 方法：通过慢病毒载体介导的NF-B通路亚基p65、p52、IKKα及IKKβshRNA来抑制NF-κB在髓核细胞中的表达以进一步阐明NF-κB信号通路在髓核细胞中对ADAMTS-4及ADAMTS-5表达的调控作用。使用激光共聚焦显微镜检测转染了慢病毒的髓核细胞中的黄色荧光蛋白YFP来保证转染的有效性。应用Western blot方法确认p65，p52I，KKα，IKKβ在髓核细胞中的表达被成功抑制后使用Western blot的方法对ADAMTS-4, ADAMTS-5及ADAMTS4/5特异的蛋白聚糖降解产物ARGSVIL的表达进行了检测。构建sh-ADAMTS-4及sh-ADAMTS-5慢病毒载体并转染人髓核细胞。应用Western

blot方法确认ADAMTS-4及ADAMTS-5在髓核细胞中的表达被成功抑制；然后检测TNF-α刺激后蛋白聚糖降解产物ARGSVIL, NITIGE水平的变化。 结果：成功构建sh-p65、sh-p52、sh-IKKα、sh-IKKβ慢病毒载体并转染人髓核细胞，使用激光共聚焦显微镜检测黄色荧光蛋白YFP，结果提示转染效率高于90%，且细胞生长未受影响。Western Blot检测转染髓核细胞中p65、p52、IKKα及IKKβ在蛋白水平的表达，结果显示：相比于对照组（LV-shC）, sh-p65、sh-p52、sh-IKKα、sh-IKKβ组相应各亚基的表达水平下降。灰度分析结果显示，相对于对照组，sh-p65、sh-p52、sh-IKKα、sh-IKKβ组相应各亚基的生成被抑制；使用TNF-处理慢病毒转染后的细胞，结果显示sh-p65、sh-p52、sh-IKKα、sh-IKKβ可阻断TNF-α对ADAMTS-4,ADAMTS-5及蛋白聚糖降解产物ARGSVIL表达的诱导作用。成功构建sh-ADAMTS-4及sh-ADAMTS-5慢病毒载体。应用Western 因为 Blot检测转染后条件培养基组及细胞蛋白组中ADAMTS-4及ADAMTS-5的表达水平，结果显示，相比于对照组（LV-shC），sh-ADAMTS-4及sh-ADAMTS-5组相应蛋白的表达水平下降。通过Western Blot方法检测使用TNF-处理慢病毒转染后髓核细的胞蛋白聚糖降解产物ARGSVIL和NITIGE的表达情况，结果显示sh-ADAMTS-4及sh-ADAMTS-5可阻断TNF-α对蛋白聚糖降解产物ARGSVIL和NITIGE表达的诱导作用。 结论：1.敲除NF-B信号通路各亚基可阻断TNF-对ADAMTS-4、ADAMTS-5及蛋白聚糖降解产物ARGSVIL表达的诱导作用。2.敲除ADAMTS-4或ADAMTS-5均可减少人髓核细胞中蛋白聚糖的降解（p<0.

05);在4h和6h时,C组和D组Pa02明显高于B组(P0.05)。 ATM激酶抑制剂分子重量 2.注射内毒素各组动物的血浆TNF-α浓度进行性升高,在1h后各时间点B组、C组和D组的血浆TNF-α浓度均显著高于A组(P0.05)。在4h和6h时,C组和D组血浆TNF-α浓度明显低于B组(P0.05)。 3.实验动物注射内毒素1h后,sICAM-1的浓度较对照组表达值显著升高(p0.05);在4h和6h时,C组和D组血浆sICAM-1浓度明显低于B组(P0.05)。 4.各实验组动物注射内毒素1h后,PMN中磷酸化p38 MAPK的含量较对照组显著升高(p0.05)。 5.对照组(A组)肺组织中NF-κB的活性较弱,内毒素组NF-κB的活性明显增加,是对照组的3.58±0.31倍;C组(为A组的1.56±0.21倍)和D(为A组的1.76±0.24倍)NF-κB的活性较B组明显降低(p0.05)。 6.对B组1、2、4、6小时p38 MAPK与TNF-α、sICAM-1的相关性分析表明,p38 MAPK与TNF-α、sICAM-1之间存在显著相关性(分别为:r=0.722,0.792,0.808,0.793, P
研究目的: 1.通过建立SD大鼠心肌缺血预处理模型,取血清测心肌酶谱并观察心肌的组织切片和超微结构,评估预处理心肌保护作用。 2.通过观察心肌缺血预处理过程中PTK活性的变化,旨在探讨心肌缺血预处理第一相对心肌细胞蛋白质的磷酸化的调控作用。 3.通过应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理第一相对一氧化氮合酶—一氧化氮系统的影响。

4.通过应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理第一相时第二信使系统的变化及其意义。 方法和结果:本研究共分四部分 第一部分:SD大鼠心肌缺血预处理模型的建立及评估方法:首先应用套管法制作在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型:用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注。实验中以左室前壁紫绀及同步心电图标S-T段抬高为结扎成功标志。实验动物随机分为缺血预处理组、缺血/再灌注组、假手术组。实验结束后,取血离心分离血清,检测心肌酶谱CK,CK-MB,LDH的活性。采用电子透射显微镜观察心肌超微结构的变化。

Capmatinib 结果: CK,CK-MB,LDH缺血预处理组较缺血/再灌注组显著降低,缺血预处理组与假手术组之间,CK、CK-MB显著差异,LDH未见明显差异。缺血预处理组:少数线粒体轻、中度固缩或肿胀,嵴排列尚整齐,偶见断裂;肌节清晰,可见小灶性肌丝溶解;内质网轻度扩张;仍可见糖原颗粒;肌纤维排列尚整齐。 第二部分:心肌缺血预处理对细胞蛋白质磷酸化的调控作用的实验研究 方法:应用套管法制作在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。随机分为预处理组、缺血/再灌注组、假手术组、预处理程序组。预处理程序组根据预处理程序进一步分为第1,2,3次缺血组和第1,2,3次再灌注组。于实验程序结束取心肌匀浆后,离心制备胞浆,Lowry法测定蛋白含量,生化法测定PTK活性。 结果:缺血预处理组PTK活性明显高于缺血再灌注组,两者间存在显著性差异。PTK含量随缺血及再灌注呈周期性波动。5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期显著差异。5min缺血预处理时明显增高,间隔再灌注时明显下降。 第三部分心肌缺血预处理对一氧化氮合酶-一氧化氮系统的影响 方法:取上清用于NO含量及NOS的活性测量。心肌石蜡包埋,SABC法内皮型NOS免疫组织化学分析。 结果: NO含量及NOS活性缺血预处理组高于缺血/再灌注组,差别显著。持续缺血前预处理程序中NO含量随缺血及再灌注呈周期性波动。NO在预处理程序中,5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期存在显著性差异。5min缺血时明显增高,间隔再灌注明显下降。内皮型NOS在心肌缺血预处理组及缺血/再灌注组中均有表达。内皮型NOS含量在缺血预处理组明显高于缺血/再灌注组,灰度平均值两组也存在显著性差异。

第四部分:第二信使在缺血预处理第一相中介导作用的实验研究 方法:所有实验动物在实验程序结束后,胞浆应用放射免疫法测量cAMP,cGMP含量及cAMP/cGMP的变化。 结果:缺血预处理组cAMP,cGMP含量明显高于缺血/再灌注组,两者存在显著性差异。心肌缺血预处理程序中cAMP,cGMP含量随缺血及再灌注呈周期性波动。预处理程序中,cAMP,cGMP含量5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期,差异显著。5min缺血预处理时明显增高,间隔再灌注程序中明显下降。 结论: 1.本实验应用大鼠左冠状动脉主干反复缺血/再灌注损伤建立心肌缺血预处理模型。 还有 2.心肌缺血预处理可维持细胞膜完整性,减少心肌酶漏出。短暂、多次缺血预处理能保护心肌细胞的超微结构,证实缺血预处理现象确有保护心肌、改善预后的作用。 3.蛋白酪氨酸激酶在心肌缺血预处理中可能使蛋白质磷酸化而起作用,可能是激发心肌缺血预处理,参与缺血预处理第一相心肌保护作用。 4.心肌缺血预处理第一相中一氧化氮可能是激发者和中介者,主要原因是一氧化氮合酶活性的改变。 5.第二信使可能中介心肌缺血预处理的心肌保护作用。cAMP,cGMP含量周期性波动可能激发心肌缺血预处理的心肌保护作用。
目的 观察中药复方制剂—复元胶囊(简称FYC)对兔膝骨关节炎(OA)模型关节软骨的组织形态学及MMP-13、TIMP-1、TIMP-2、IL-1β、TGF-β2表达的影响;研究FYC含药血清对软骨细胞增殖和P38信号通路的干预作用,探讨FYC对骨关节炎软骨退变的防治作用及可能的作用机理。 方法 1.选用健康新西兰大白兔66只,用改良Hulth法制备兔膝骨关节炎模型,以FYC灌胃为干预治疗手段,观察各组股骨内髁关节软骨大体、光镜和电镜下的病理变化。采用免疫组化法检测退变膝关节软骨MMP-13、TIMP-2、IL-1β及TGF-β2的蛋白质水平,RT-PCR法检测MMP-13、TIMP-1、TIMP-2mRNA的表达。从骨关节炎软骨的破坏因素和保护因素,从mRNA转录水平到蛋白质表达水平,多层次、多角度观察FYC对骨关节炎软骨退变的影响。 2.选用健康21-28d龄SD大鼠,用酶消化法原代培养软骨细胞,给予不同浓度的FYC含药血清(0%、5%、10%、20%)刺激第3代软骨细胞,作用时间分别为24h、48h、72h,采用MTT法检测FYC含药血清对软骨细胞的增殖,根据OD值选择FYC含药血清的最佳作用浓度和最佳作用时间纳入后续试验。细胞化学免疫法检测Ⅱ型胶原表达以鉴定软骨细胞。采用Western blot法研究FYC含药血清对软骨细胞中p-p38和MMP-13表达的干预作用,从信号通路的途径,探讨FYC防治骨关节炎软骨退变的可能作用机制。 结果: 1.

建立体外多巴胺诱导的黑素细胞氧化应激凋亡模型。2.对文献报道的6种具有抗氧化抗凋亡的中药成分,利用多巴胺诱导黑素细胞凋亡的体外模型,检测其对氧化应激引起的黑素细胞凋亡的保护作用。3.探讨其中对黑素细胞有保护作用的中药成分(芹黄素)对多巴胺引起的氧化应激及相关的c-Jun氨基端激酶(c-Jun

LY2835219数据表 N-terminal Kinase,JNK)、p38和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/Akt(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog)信号转导通路的影响,初步探讨其作用机制。 方法:1.采用健康儿童包皮组织原代培养获得黑素细胞,免疫细胞化学法检测S-100蛋白,进行细胞鉴定。MTT法检测不同浓度及作用时间的多巴胺对黑素细胞活力的影响。通过Annexin-V/PI双染流式细胞术凋亡细胞比例检测及Western Blot法检测caspase3和多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的活化,观察多巴胺对黑素细胞凋亡的影响。DCFH-DA(2’,7’-dichloro?uorescin diacetate)法流式细胞术检测多巴胺对黑素细胞活性氧分子(ROS)生成的影响。2. MTT法检测芹黄素等6种中药成分预处理对多巴胺引起的黑素细胞活力降低的影响。采用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测这6种中药成分对多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的影响。3. Western Blot法检测筛选出的有效中药成分(芹黄素)对多巴胺引起的caspase3和PARP的活化的影响。DCFH-DA法流式细胞术检测芹黄素对多巴胺诱导的黑素细胞活性氧分子(ROS)生成的影响。4. Western Blot法检测多巴胺对黑素细胞的p38、JNK及Akt信号通路的影响。Annexin-V/PI双染流式细胞术检测p38抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125、Akt抑制剂LY294002预处理黑素细胞对多巴胺促凋亡作用的影响。Western

Blot法检测芹黄素预处理对多巴胺激活的p38、JNK及Akt信号通路的影响。 结果: 1.多巴胺诱导的体外黑素细胞氧化应激凋亡模型的建立 原代培养纯化的黑素细胞,显现出黑素细胞的明显特征, S-100免疫细胞化学鉴定证实为高纯度黑素细胞。多巴胺可呈浓度依赖性和时间依赖性抑制黑素细胞活力。500μM多巴胺作用于黑素细胞12h,细胞活力下降约50%。Annexin-V/PI双染流式细胞术结果显示,不同浓度多巴胺作用于黑素细胞12h,可呈浓度依赖性增加凋亡细胞比例。Western AUY922 Blot结果显示,500μM多巴胺作用黑素细胞6h或12h,caspase3和PARP出现明显活化,12h组活化的PARP和caspase 3蛋白含量高于6h组。DCFH-DA法流式细胞术结果显示,多巴胺可明显增加黑素细胞ROS含量。以上结果表明500μM多巴胺作用于黑素细胞12h可明显诱导黑素细胞氧化应激和凋亡。 2.抑制黑素细胞凋亡的抗氧化中药成分筛选 根据文献报道选出具有抗氧化和抗凋亡作用的芹黄素、芍药苷、葛根素、麦角甾苷、人参皂甙Rb1和姜黄素6味中药成分。结果发现,不同浓度的6味中药成分预处理黑素细胞后,芹黄素可明显抑制多巴胺诱导的黑素细胞活力降低,减少多巴胺诱导的黑素细胞凋亡。其他中药成分在实验浓度下对黑素细胞活力和凋亡均无明显影响。

3.芹黄素对多巴胺诱导的黑素细胞氧化应激及凋亡的影响 0.3~10μM的芹黄素可呈浓度依赖性的抑制多巴胺引起的黑素细胞活力降低的作用,减少凋亡细胞比例。芹黄素预处理可降低多巴胺对PARP和caspase 3的活化,抑制多巴胺诱导的ROS生成。 4.芹黄素对黑素细胞氧化应激相关的凋亡信号通路的影响 500μM多巴胺作用于黑素细胞,p38、JNK及Akt的磷酸化蛋白含量均呈时间依赖性增加。p38抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125、Akt抑制剂LY294002预处理,可明显减少多巴胺诱导的Annexin-V阳性细胞比例,证实多巴胺的促黑素细胞凋亡机制有赖于p38、JNK及Akt信号通路。而芹黄素预处理可明显抑制多巴胺激活的p38、JNK及Akt的磷酸化,说明p38、JNK、Akt信号通路参与了芹黄素的抗多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的机制。 selleck抑制剂 结论: 1. 500μM多巴胺作用于黑素细胞12h可明显诱导黑素细胞氧化应激和凋亡。 2.芹黄素可抑制多巴胺诱导的黑素细胞ROS生成,减少黑素细胞凋亡。芍药苷、葛根素、麦角甾苷、人参皂甙Rb1、姜黄素在实验浓度范围内对多巴胺诱导的黑素细胞活力降低和凋亡无明显保护作用。 3.多巴胺的促黑素细胞凋亡作用有赖于p38、JNK、Akt信号通路的激活。p38、JNK、Akt信号通路参与了芹黄素的抗多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的机制。
葡萄糖是乳汁合成的主要前体物质之一,与乳产量和乳品质密切相关。本研究围绕奶牛乳腺上皮细胞葡萄糖摄取的调控及其对乳成分合成的影响展开了以下研究：首先建立了泌乳奶牛乳腺上皮细胞模型；其次分别研究了泌乳相关激素和单糖基质对葡萄糖转运载体基因表达和葡萄糖摄取的影响；最后探讨了葡萄糖供应量对主要乳成分(乳脂和乳糖)合成的影响及其可能机制。主要研究结果如下： 1.泌乳奶牛乳腺上皮细胞模型建立及其功能检测 该部分旨在建立奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型。试验选择DMEM/F-12培养液,用组织块培养法得到奶牛乳腺上皮细胞。为维持乳腺细胞的泌乳功能,在培养体系中添加了催乳素、胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白等成分。根据乳腺上皮细胞和成纤维细胞对胰酶敏感度的不同,采用0.25%胰酶和0.15%胰酶加0.02%EDTA反复酶差消化,得到较为纯化的乳腺上皮样细胞。培养细胞呈单层、鹅卵石样铺展,可形成腺泡和岛屿状结构,具有上皮细胞的典型形态特征。此外,通过乳腺上皮细胞特征性细胞角蛋白18免疫细胞化学鉴定和细胞生长曲线分析,证明培养得到的细胞是正常乳腺上皮细胞。研究发现细胞传至第10代,细胞依然生长旺盛。通过细胞亚显微结构观察、乳脂形态观察、αsl酪蛋白基因表达、酪蛋白Western-blot含量检测等方法检测乳腺细胞的泌乳功能,证明培养至第10代的乳腺上皮细胞仍具有乳汁合成和分泌功能,表明本研究建立的奶牛乳腺上皮细胞培养模型可作为乳腺生理相关功能研究的模型。 2.泌乳相关激素对乳腺细胞主要葡萄糖转运载体基因表达的影响及相关信号通路研究 该部分研究了泌乳相关激素(催乳素、胰岛素和氢化可的松)单独及组合作用对GLUT1和GLUT8基因表达的影响,探讨了胰岛素调控GLUT8基因表达和葡萄糖摄取的相关信号通路。结果发现,不同浓度催乳素和胰岛素对GLUT1基因表达均无显著影响(P>0.05),高剂量催乳素可显著降低GLUT8基因表达(P<0.

12.组织学染色收集各组大鼠腹主动脉,制备石蜡切片。应用免疫组织化学染色,观察血管组织内ACE2及ACE的分布及表达情况。3.13.统计学分析实验所得数据均以均数±标准差表示,采用SPSS软件进行统计分析。两组之间的统计分析采用非配对t检验,多组之间的统计分析采用单因素方差分析,P<0.01),同时ACE2的活性下降(p<0.05)；而18%机械牵张力促进ACE的表达(p<0.05),其mRNA于刺激后12小时达到峰值(p<0.01),而Ang(1-7)水平显著降低(P<0.01),且这一趋势持续至机械牵张力刺激24小时。在张力-效应实验中,与静止对照组相比,18%机械牵张力刺激12小时后,ACE2表达下降(p<0.05)、活性降低(p<0.05)；与生理牵张力刺激组相比,18%牵张力刺激12小时后,ACE2表达下降(p<0.05)、活性降低(p<0.01)。而18%牵张力作用12小时后,其ACE表达比静止对照组显著增加(p<0.01),比生理牵张力刺激组亦显著增加(p<0.01),而Ang(1-7)水平降低明显(P<0.01),Ang(1-7)水平亦降低明显(P<0.01)。4.2.体内试验验证压力负荷对血管平滑肌细胞ACE2及ACE表达的影响免疫组化结果显示：与假手术组相比,大鼠腹主动脉缩窄5及7天后,ACE2表达下降(P<0.01)；而大鼠腹主动脉缩窄7天后,ACE表达升高(P<0.01)。WesternBlot结果显示：与假手术组相比,大鼠腹主动脉缩窄5及7天后,ACE2表达下降(P<0.01)；而ACE表达升高(P<0.01)。4.3.ACE2对病理性牵张力调节平滑肌细胞增殖、迁移及胶原代谢的影响Brdu掺入法结果提示：与Ad-GFP组相比,Ad-GFP+stretch组促进平滑肌细胞的增殖(P<0.01)；与Ad-GFP+stretch组相比,Ad-ACE2+stretch组抑制平滑肌细胞增殖(P<0.05)。细胞划痕试验表明：与Ad-GFP组相比,Ad-GFP+stretch组促进平滑肌细胞的迁移(P<0.01)；与Ad-GFP+stretch组相比,Ad-ACE2+stretch组抑制平滑肌细胞迁移(P0.05)。以上结果表明,

还有 ACE2参与病理性牵张力(18% elongation,1Hz)对平滑肌细胞增殖、迁移的调节,但是不参与对胶原代谢的调节。4.4.p38参与病理性牵张力对ACE2的调节作用病理性牵张力(18% elongation,1Hz)使得磷酸化p38及磷酸化JNK水平升高(p0.05)。我们应用ERK1/2抑制剂(PD98059)、JNK抑制剂(SP600125)和p38抑制剂(SB203580)干预病理性牵张力(18% elongation,1Hz)刺激。检测发现SB203580能够阻断病理性牵张力对ACE2的下调作用(P
目的研究人绒毛滋养层细胞中调节细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的信号通路及p38MAPK信号通路在滋养细胞体外侵袭中的作用。方法体外无血清培养人绒毛滋养细胞,分别加入p38MAPK抑制剂(SB203580),JNK抑制剂(SP600125),ERK抑制剂(PD098059),用RT-PCR及Western

blot方法观察阻断剂对EMM-PRIN表达的影响。用不同浓度的佛波酯(PMA)作用于滋养细胞,ELISA方法检测滋养细胞中p38MAPK的活性变化,用transwell细胞侵入系统检测滋养细胞的侵袭作用;加入不同浓度的SB203580,观察阻断剂对滋养细胞侵袭性的影响。结果JNK抑制剂、ERK抑制剂对滋养细胞分泌EMMPRIN无影响,p38MAPK抑制剂以时间剂量依赖的方式抑制滋养细胞表达EMMPRIN,SB203580浓度为5、10、15及20μmol/L作用24h后,EMMPIRN的抑制率分别为7.3%、24.6%、31.8%及39%;加入10μmol/L的SB203580培养24h后即可抑制EMMPRIN基因和蛋白的表达,抑制率为22%,培养48h和72h抑制率分别为45%和76%。向培养的细胞中加入浓度为0.1、1、10mmol/L的PMA作用30min,PMA以时间剂量依赖的方式激活p38MAPK,而SB203580以时间剂量依赖的方式抑制PMA对p38MAPK的激活。PMA可以促进滋养细胞体外侵袭作用,5mmol/L的SB203580能明显的抑制滋养细胞的体外侵袭能力,也能抑制PMA对滋养细胞侵袭活性的激活。结论p38MAPK信号传导途径参与了人绒毛滋养细胞中EMMPRIN的表达。p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为中有重要的作用,p38MAPK激动剂可能会为子痫前期-子痫的防治提供新的途径。
目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 此网站 GDC-0449 MAPK)及其抑制剂SB203580在胰岛素调节葡萄糖转运子4(GLUT4)活性机制中的作用。方法:分别测定胰岛素和SB203580孵育条件下骨骼肌细胞p38

MAPK的磷酸化水平和活性;检测p38 MAPK或SB203580是否与GLUT4直接结合;并测定SB203580对光化学标记细胞膜上的GLUT4的影响。结果:与胰岛素孵育0min时相比,100nmol/L胰岛素使p38 MAPK磷酸化水平增加,最大值为0min时的(2.43±0.21)倍;胰岛素还使p38α和p38βMAPK的活性分别增加了(10.13±0.48)和(7.92±2.17)倍;SB203580可抑制胰岛素的作用;p38 MAPK在体内不与GLUT4直接结合;SB203580仅抑制胰岛素刺激下的GLUT4光化学标记。结论:p38MAPK或SB203580不直接与GLUT4结合;对SB203580敏感的分子参与了胰岛素调节GLUT4活性的作用。
目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜组织中磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的表达及 p38 MAPK 抑制剂 SB203580对活动性 UC 患者肠黏膜组织 TNFα表达的影响。方法 30例活动性 UC 患者被纳入本研究,以15例结肠癌患者的癌旁正常组织作为对照。免疫组化法检测 UC 患者肠黏膜活检组织中磷酸化 p38 MAPK 的表达。体外组织培养条件下观察 SB203580对UC 患者肠黏膜组织 TNFα表达的影响,ELISA 法检测培养上清液中 TNFα含量。结果(1)UC 患者肠黏膜磷酸化 p38 MAPK 的表达明显高于正常肠黏膜,A 值分别为549.22±32.54、143.52±11.89,阳染面积分别为[(1680.61±115.30)×10~(-5)、(351.68±12.73)×10~(-5)]μm~2,P 值均0.

7和小鼠腹腔巨噬细胞为细胞模型,应用P2Y6受体选择性激动剂(UDP)和阻断剂(MRS2578),通过激活或阻断P2Y6受体相关信号通路,研究P2Y6在固有免疫应答中的调控作用及其分子机制。我们发现P2Y6能够促进巨噬细胞中细胞因子／趋化因子的转录表达,进而达到增强单核／巨噬细胞的趋化迁移作用。具体表现在：一、UDP激活P2Y6可以显著提高巨噬细胞中细胞因子／趋化因子的表达,如MCP-1,

一般 MIP-lα/β, IFN-α/β, TNF-α以及免疫共刺激分子CD80/86的转录表达；二、UDP刺激巨噬细胞后,其培养上清能明显引起单核细胞／巨噬细胞的趋化迁移,而这种作用能够被P2Y6选择性抑制剂MRS2578所抑制；三、UDP激活P2Y6后可以显著增强巨噬细胞RAW264.7的迁移能力。 在此基础上,我们对P2Y6所参与调控巨噬细胞的信号通路进行了系统分析。Western blot结果显示P2Y6的激活能显著提高MEKl/2、PI3K、STAT1以及IRF3等的磷酸化水平,但对Src和IKK却没有明显作用；磷酸化MEKl/2明显激活ERKl/2通路,而P38及JNK没有显著性变化。应用MAPKs信号通路的专一性抑制剂,如MEK1/2的U0126和PD9805,结合荧光素酶报告基因实验(Luciferase assay)及EMSA技术,发现P2Y6主要通过激活MEKl/2-ERK1/2-AP1相关信号通路,从转录水平上调控了趋化因子MCP-1的表达。此外,P2Y6的激活通过提高IRF3和STAT1磷酸化水平,显著性上调了Ⅰ型干扰素IFN-α/β等的转录表达,这些结果提示P2Y6受体在机体抗感染免疫中发挥着重要作用。 最后,我们通过MCP-1中和抗体实验和小鼠空气泡模型(Air pouch model),进一步确认了P2Y6通过上调趋化因子MCP-1的表达,进而在体内外调控单核／巨噬细胞招募的作用。同时,我们应用GFP标记的E.coil成功建立小鼠腹膜炎模型(Peritonitis),结果表明UDP通过激活P2Y6不仅可以提高局部感染组织对单核／巨噬细胞的招募,还能够显著增强小鼠清除病原体的能力,提高了小鼠的存活率。

综上所述,嘌呤受体P2Y6能够通过MEKl/2-ERKl/2-AP1信号通路的激活,显著提高巨噬细胞中MCP-1等趋化因子的转录表达,在体内提高了单核／巨噬细胞的招募作用,最终达到增强机体抗感染能力,提高宿主存活的目的。本论文的研究为基于G蛋白偶联受体P2Y6的免疫调控药物的开发打下了良好的理论基础。
第一部分:TEA和4-AP敏感型钾通道参与由gp120引起的海马神经元的凋亡 虽然HIV病毒壳蛋白gp120对神经元的损伤作用在HIV相关性痴呆(HIV-associated demential,HAD)发展的过程中起到重要作用,但致其损伤的作用靶点仍未明确。因此,明确gp120引起中枢神经系统神经元损伤的作用靶点对于HAD的防治显得尤为重要。近期有报道称,钾通道可能是引起HAD的又一靶点,因为持续性的钾离子外流会引起细胞凋亡。因而,该实验中,通过运用全细胞膜片钳的实验方法,我们发现gp120能显著引起外向钾电流的增高,且呈明显的浓度依赖性。实验进一步表明,TEA和4-AP敏感型钾通道均参与gp120引起的钾电流增大,这一结果与MTT和TUNEL实验中,TEA和4-AP能有效阻断gp120引起海马神经元的毒性一致。以上结果表明:gp120引起TEA和4-AP敏感型钾电流的增大,促发钾离子的外流,最终导致神经元的凋亡。 并且 第二部分:4-AP敏感型钾电流参与由甲基苯丙胺引起的海马神经元的凋亡 甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)是目前广泛滥用的一种非法精神兴奋剂。Meth的滥用可引起神经元的损伤,例如皮层灰质的缺失,海马神经元的萎缩,但其机制仍不清楚。细胞体积与胞内钾离子的稳态密切相关,持续性的钾离子外流可引起细胞凋亡性体积缩小。该实验中,我们以原代培养胚胎大鼠的海马神经元作为研究对象,探索由Meth引起的神经元损伤与钾通道之间的关系。利用全细胞膜片钳的方法,我们发现,Meth能明显增加4-AP敏感型钾电流的电流密度,而对TEA敏感型钾通道作用不明显。与此结果一致的是,利用MTT和TUNEL的方法,我们发现4-AP能够部分阻断Meth引起的海马神经元的毒性作用。进一步研究表明,Meth增大4-AP敏感型钾电流可能是通过抑制ERK通路的磷酸化来实现的。

Protease Inhibitor Library 这些结果表明,Meth可能通过抑制ERK的磷酸化引起4-AP敏感型钾电流的增大,最终导致海马神经元的损伤。 第三部分甲基苯丙胺与gp120对海马神经元的综合作用 毒品的滥用是神经退行性疾病的重要危险因素,同时也是HIV感染的主要途径之一。毒品和HIV病毒的共同作用可能会造成更为严重的神经系统的损伤,加快HAD的发展。甲基苯丙胺(Meth)是目前最常见,使用最为广泛的毒品之一,研究表明,Meth对中枢神经系统有直接的毒性作用,可引起海马的皱缩,胶质细胞的激活等。基于第一部分gp120及第二部分Meth对海马神经元的损伤作用,我们推测,gp120可能会与Meth对神经元产生相加或协同的毒性作用,引起更为严重的细胞损伤。因此,我们利用全细胞膜片钳,MTT和TUNEL的实验方法,初步探索了gp120+Meth处理组与gp120或Meth单独处理组引起的海马神经元的损伤,但在该实验中,我们并未到观察到HIV病毒蛋白gp120与Meth对海马神经元的综合作用,其原因值得进一步探索。
近年来越来越多的证据提示,高糖介导的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶活性增高引起的氧化应激反应对糖尿病微血管并发症的病情发展起着重要作用。NADPH氧化酶最初在吞噬细胞中发现,近年来的研究显示,许多非吞噬细胞中的NADPH氧化酶是活性氧(ROS)的主要来源,尤其在细胞因子、高糖、高脂等作用下可以产生更高水平的ROS。白藜芦醇(Resveratrol)是一种常见于葡萄、虎杖等植物中的一种多酚类化合物,目前的研究显示它具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎以及延缓衰老等多种药理功能。糖尿病动物模型显示白藜芦醇对糖尿病微血管并发症有显著的保护作用。但白藜芦醇对高糖介导的肾小球系膜细胞NADPH氧化酶的激活和ROS的产生是否有保护作用仍不清楚。本课题在体外和体内水平研究了白藜芦醇在高糖所致肾小球系膜细胞损伤中的保护作用以及对NADPH氧化酶的影响。 我们在标准糖浓度下(5.

5 mm3为成瘤标准。观察各组荷瘤鼠皮下移植瘤成瘤时间、瘤体积和瘤重的差异。 结果与未转染的和转染空质粒的HeLa细胞接种裸鼠比较,接种转染pCMV/nuc/M-CSF和pCMV/myc/cyto-M-CSF的HeLa细胞形成的肿瘤成瘤时间较早,瘤体积和瘤重明显增大( P
胰岛素和运动均促使葡萄糖转运子4转位到细胞膜上,转运更多的葡萄糖进入细胞而调节细胞的葡萄糖摄取量。相对于胰岛素,对运动／肌肉收缩刺激骨骼肌摄取葡萄糖的机制了解较少。 目前研究运动／肌肉收缩多应用转基因动物,费用昂贵,而且不能应用基因沉默等技术。而培养的细胞株则没有诸多限制,可单独分析细胞内信号转导,排除血液循环成分和血液动力学因素的影响,更好地理解锻炼如何改善胰岛素作用。目前广泛应用的L6骨骼肌细胞不具收缩能力。具收缩能力的C2C12骨骼肌细胞仅表达少量的GLUT4,使得运动调节葡萄糖转运的研究,因缺少合适的肌肉模型而受到限制。本研究的目的是建立C2C12GLUT4myc细胞株,并应用此细胞模型探讨运动／肌肉收缩刺激骨骼肌细胞GLUT4运输的机制。研究内容和方法：

第一部分建立C2C12GLUT4myc细胞株；检测分化能力和GLUT4myc的表达量,确定分化能力强并高表达GLUT4myc的细胞株。与L6GLUT4myc比较膜蛋白和信号分子以及GLUT1的表达；免疫荧光检测GLUT4myc在细胞中的定位；测定此细胞响应胰岛素刺激的GLUT4转位的时间曲线和剂量曲线。 www.selleckchem.cn/products/Rapamycin.html 第二部分比较carbachol、AICAR和胰岛素刺激的C2C12GLUT4myc肌管葡萄糖摄取和GLUT4转位,并观察三种刺激物作用的叠加性。通过使用各种信号蛋白的抑制剂,分析刺激GLUT4转位的信号机制。

第三部分比较三种刺激物对信号分子的作用,检测信号分子的活性。结果： 建立了C2C12GLUT4myc细胞株,GLUT4myc的表达量与L6GLUT4myc中的GLUT4myc量接近,约为小鼠骨骼肌GLUT4的10倍。C2C12GLUT4myc细胞表达IRAP和TfR的量高于L6GLUT4myc, VAMP2和VAMP7的表达在两种细胞中接近。C2C12GLUT4myc细胞表达AS160、AMPKα2和GLUT1高于L6GLUT4myc细胞,而Akt1和Akt2的表达则低于L6GLUT4myc。两种细胞表达AMPKα1、Akt3和PKC的量相近。GLUT4myc主要分布于细胞核周围。C2C12GLUT4myc细胞的葡萄糖摄取和GLUT4转位对胰岛素的作用呈剂量和时间依赖关系,最大值为基础状态的1.63±0.05倍。 selleck化学药品 比较carbachol、AICAR和胰岛素刺激的C2C12GLUT4myc肌管葡萄糖摄取和GLUT4转位,并观察三种刺激物作用的叠加性的结果显示,carbachol刺激葡萄糖摄取和增加细胞表面GLUT4myc含量,使之分别增加为基础组的1.60±0.08倍和1.77±0.08倍。胰岛素使葡萄糖摄取和细胞膜上GLUT4myc分别增加1.55±0.02倍和1.63±0.05倍。AICAR使葡萄糖摄取和GLUT4转位分别增加1.63±0.11倍和1.84±0.11倍。三种刺激物的作用均具有叠加性。胰岛素和carbachol一起孵育使GLUT4myc细胞转位增加2.57±0.30倍。胰岛素和AICAR一起孵育使GLUT4myc转位增加2.80±0.30倍。Carbachol和AICAR一起孵育使GLUT4myc转位增加2.95±0.38倍。LY294002不能抑制carbachol刺激的GLUT4myc转位,但此作用可被Compound

BGB324 C抑制85%。BTS可抑制57%的carbachol刺激的GLUT4myc转位。Compound C抑制84%AICAR刺激的GLUT4myc转位,但不影响基础和胰岛素作用下的细胞膜上的GLUT4myc水平。BIM和KN93均抑制carbachol刺激的GLUT4myc转位。 比较三种刺激物对信号分子的作用的结果显示,carbachol和AICAR激活AMPK; Compound C抑制carbachol和AICAR刺激的AMPK磷酸化。carbachol不能诱导Akt的磷酸化,但增加Rab-GAP,AS160Thr642的磷酸化。 结论： 1.可收缩的C2C12GLUT4myc骨骼肌细胞的GLUT4myc转位对胰岛素作用呈剂量和时间依赖关系；细胞响应carbachol刺激的收缩作用,GLUT4转位到细胞膜并摄取葡萄糖。 2. L6GLUT4myc和C2C12GLUT4myc骨骼肌细胞分别高表达胰岛素关键信号分子Akt2和运动关键信号分子AMPKa2,提示此两种细胞株可分别用于研究胰岛素作用和运动／肌肉收缩作用的细胞模型。 3. Carbachol去极化诱发的收缩刺激骨骼肌细胞GLUT4转位和葡萄糖摄取,其信号转导机制不同于胰岛素和AICAR,参与的信号分子可能涉及LKB1、AMPK. CaMKⅡ和PKC。肌肉收缩可替代胰岛素促进骨骼肌摄取葡萄糖。 4.

所有类型的胃癌组织均显示了较强的染色，与胃溃疡相比均有显著差异性。凝集素免疫组化结果与凝集素芯片结果一致。

6.在不同类型的胃癌组织中，与MPL特异结合的含有GalNAc的糖蛋白的表达量从高到低依次为：粘膜内癌、印戒细胞癌、腺癌、淋巴转移腺癌、未分化癌、类癌； NU7441制造商 7.在不同类型的胃癌组织中，与VVA特异性结合的GalNAc和GalNAcα-Ser/Thr（Tn）的糖蛋白的表达量从高到低依次为：粘膜内癌、印戒细胞癌、类癌、未分化癌、腺癌、淋巴转移腺癌； 8.凝集素芯片检测糖蛋白技术可为胃癌的早期诊断及治疗提供依据。
表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）对于多种细胞具有促进增殖和营养作用。EGFR在多种肿瘤细胞内高表达，说明其与这些肿瘤的发生、发展等变化有关。另外，大量研究表明EGFR信号系统与肿瘤的发生和肿瘤耐药性关系密切，并且EGFR的异常变化也是骨肉瘤的显著特点。蜂毒（Beevenom, BV）做为免疫相关疾病治疗制剂已广泛应用，特别是在肿瘤治疗领域其作用十分显著。研究发现，肾癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌以及白血病细胞均可成为BV主要成分蜂毒肽（Melittin）的靶标。Melittin激活PLA2从而发挥细胞毒作用已被公认为BV抗肿瘤的主要作用机制。Melittin通过激活Caspase酶和基质金属蛋白酶，诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。现已证明，将Melittin与激素受体、特异性抗体等多种具有导向作用的物质融合表达，可以有效治疗多种肿瘤。本研究将Melittin通过柔性肽与抗EGFRscFv连接，并由大肠杆菌进行表达，制备了融合蛋白antiEGFR/MEL。对表达条件进行了优化，并进行了复性和初步纯化。利用表达的融合蛋白，针对人骨肉瘤细胞进行了体内、外抑瘤实验研究。研究结果表明，含有EGFR单链抗体的重组蛋白antiEGFR/MEL可与OS732细胞有效结合，并定位于OS732细胞膜表面。antiEGFR/MEL能够有效抑制OS732细胞的生长，但对正常细胞L02无明显作用。另外，antiEGFR/MEL抑制OS732细胞生长的现象，呈现明显的时间效应和剂量效应趋势。本研究还利用BALB/c小鼠结合小鼠骨肉瘤细胞S180，建立了实体肉瘤细胞模型，并开展了体内抑瘤实验研究。研究结果表明，antiEGFR/MEL可以抑制S180实体肿瘤生长、延长动物模型生存期、延长动物模型肿瘤倍增时间和肿瘤生长延迟时间。以上结果说明，antiEGFR/MEL具有应用于骨肉瘤生物治疗研究的潜质。
原发性肝癌在全世界恶性肿瘤发病率中占第五位,癌症相关死亡率中占第三位；而我国原发性肝癌的发病率和死亡率远高于其他国家,在恶性肿瘤发病率中占第三位,恶性肿瘤死因排位中占第二位。大部分肝癌患者发现时已为晚期,需要进行全身治疗,包括全身化疗和靶向治疗；然而全身化疗对肝癌患者的治疗效果并不理想,主要原因在于肿瘤细胞的耐药和患者不能耐受化疗的毒副反应。为了减轻化疗药物的毒副作用和增加药物的疗效,对药物进行分子修饰,使其能够在患者体内靶向作用于肿瘤组织是目前研究的一个方向。

目前用于原发性肝癌的化疗药物中,阿霉素(DOX)是最为常见药物之一,但大剂量的阿霉素治疗将给患者带来严重的毒副反应,如血液毒性、胃肠道反应、肝肾毒性,特别是对心脏的毒性。 Cathepsin 为什么 PF-02341066体外 B (Cat B)是位于溶酶体中的一种蛋白酶,在肿瘤细胞中常呈高表达,有促进肿瘤细胞侵袭和转移的作用。并且Cat B可特异酶解Phe-Lys二肽,在靶向抗肿瘤新药研发中,Cat B有望成为一个潜在的分子靶点。 为此,Dubowchik等设计了一个针对Cat B的阿霉素前体药物PDOX,其结构式为Ac-Phe-Lys-PABC-DOX, PABC的作用是为了增加DOX和Phe-Lys的空间距离,以利于Phe-Lys与Cat B的接触。在血循环和正常组织中,几乎无Cat B的表达,前体药物以非活性存在；当药物进入肿瘤等富含Cat B的组织时,Phe-Lys二肽被Cat B裂解,暴露的PABC部分可迅速自行水解,释放出活性的DOX,因此药物对富含Cat B的癌组织具有靶向性,而对正常组织的毒副作用减轻。 本课题组先前用新药PDOX治疗胃腹膜转移癌的动物模型研究中,发现PDOX对抗癌转移有明显的疗效,为了验证PDOX对肝癌的治疗效果,我们设计了PDOX治疗高转移性肝癌裸鼠原位移植模型的实验。

第一部分：PDOX对高转移性肝癌裸鼠原位移植模型的疗效研究 目的：比较PDOX与DOX对高转移性肝癌裸鼠原位移植模型的疗效。方法：在细胞培养室将HCCLM9细胞培养至对数生长期,收集细胞后,取适量注射入2只裸鼠肩部皮下,当肿瘤生长至1cm左右时,手术取出皮下种植瘤,将肿瘤切成1mm3,手术植入33只雄性裸鼠肝脏。术后观察裸鼠伤口和肿瘤生长情况。在第8天,裸鼠被随机分为三组,分别为Control组10只、DOX组11只和PDOX组12只,通过尾静脉注射分别给予等体积的生理盐水、DOX和PDOX,每8天给1次药,每4天称1次体重,在实验终点,全部裸鼠行腹部MRI检查,后行安乐死,取血标本行肿瘤标志物AFP检查；解剖裸鼠,详细记录解剖所见,测量肝脏肿瘤重量和体积,计算荷瘤比,按ePCI评分标准进行评分；对各主要组织和脏器行组织病理学检查,观察肺转移和其他转移情况。结果：至实验终点,PDOX组和DOX组动物体重均有轻微的下降,但PDOX组较DOX组小鼠一般状况更好；从D30至D36,由于肝肿瘤负荷过重和腹水,导致对照组体重上升。在实验终点,所有裸鼠行腹部MRI检查以获得代表性的影像。与对照组比较,PDOX和DOX治疗组肿瘤重量分别降低了43.6%和42.0%,同时肿瘤体积分别缩小了53.4%和49.1%(P<0.05)：与对照组相比,PDOX组血小板最高(1.67倍,P<0.05),其次为DOX组(1.59倍,P<0.05)；红细胞和血红蛋白在3组间没有统计学差异。在肝功能指标中,与对照组比较,DOX和PDOX组GGT和AST水平均显著降低(P<0.05),但PDOX组Ca2+显著高于DOX组和对照组(P0.05)；VEGF和E-cadherin的阳性表达率在3组间均无统计学差异(P>0.05)；D2-40中位微淋巴管密度值在对照组、DOX组和PDOX组分别为0.5(0.0-3.2)、1.8(0.0-8.4)和1.8(0.0-5.8),3组无统计学差异(P>0.