KRAs,HER2和BRAF突变、ALK、RET、RoS1融合基因情况以及患者临床病理特征。对研究中发现的FGFR融合基因突变标本与野生FGFR对照标本(连续收集自2011年7月至2012年12月的肺鳞癌样本),以免疫组织化学法(immunohi stochemical, IHC)检测FGFR1，FGFR2,FGFR3表达。研究发现,1328例非小细胞肺癌中有17例FGFR融合基因,其中15例为FGFR3-TACC3,2例为BAG4-FGFR1,并且与其他基因突变/融合不共存。有吸烟史(P3cm (P<0.001)患者更易出现FGFR基因融合,腺癌FGFR融合基因样本中多含实体亚型。FGFR融合基因状态与免疫组织化学表达呈正相关,FGFR基因融合与患者的总生存时间以及无复发生存时间无明显相关性。本课题的研究成果表明,中国人群中1.3%的非小细胞肺癌、3.50%的肺鳞癌中存在FGFR基因融合。肿瘤最大径大于3厘米的吸烟鳞癌患者更易出现FGFR融合基因。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动基因突变／融合筛选提供参考,有利于FGFR靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。
研究背景：乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来我国乳腺癌的发病率上升趋势明显,高居女性恶性肿瘤发病率的第一位。尽管手术治疗和术后多种辅助化疗对患者的预后有明显的改善,但是乳腺癌仍具有较高的复发率和死亡率。研究表明,乳腺癌的增殖及耐药是导致患者死亡的主要原因。因此,明确乳腺癌的发生发展机制,寻找有效的治疗靶点是延长乳腺癌患者生存时间的关键。分子靶向治疗是当今乳腺癌药物治疗的最新发展方向,目前已有分子靶向相关药物应用于临床。最近研究表明,与单靶向治疗相比,多靶点药物联合应用显示出更有效的治疗作用。NVP-BEZ235是PI3K/mTOR双靶点抑制剂,可有效抑制多种肿瘤的增殖；曲古霉素(TSA)为组蛋白去乙酰化酶抑制剂,是新型的抗肿瘤药物。有关BEZ235与TSA联合应用在非小细胞肺癌及胰腺癌中的研究已有报道,但在乳腺癌中的作用及机制尚不清楚。前期研究发现,PI3K通路及蛋白乙酰化修饰在乳腺癌的发生发展中起重要的作用,因此,深入研究BEZ235与TSA两种抑制剂联合应用对乳腺癌的抑制作用及其分子机制有重要的临床指导意义。研究目的：本研究通过体外细胞学实验检测BEZ235和TSA联合用药对乳腺癌细胞生物学行为的影响,并探讨其协同抑制肿瘤增殖的作用及可能的分子机制,为乳腺癌靶向治疗提供新的药物选择方案。材料和方法：通过MTT法观察BEZ235、TSA单独或联合用药对不同乳腺癌细胞系T47D,

Fasudil研究购买 BYL719溶解度 SKBR3, MDA-MB-231, MCF-7, MDA-MB-468, MDA-MB-453增殖情况的影响,分析BEZ235与TSA联合用药的协同作用；通过平板克隆形成实验检测联合用药对乳腺癌细胞增殖的抑制作用；通过划痕实验观察联合用药对细胞迁移能力的影响；通过基因芯片筛查发现单独用药与联合用药组乳腺癌细胞的差异基因表达谱,初步明确联合用药的可能作用机理；采用流式细胞术及Hoechst33342细胞核染色法检测药物处理后的乳腺癌细胞凋亡率的变化；Western PLX3397订单 blot方法检测BEZ235及TSA处理后PI3K/Akt信号通路及HDAC相关蛋白的改变,并进一步分析联合用药诱导乳腺癌细胞凋亡与自噬相关因子的变化。结果：MTT结果显示,BEZ235与TSA可协同抑制乳腺癌细胞株MCF-7、T47D细胞的增殖；平板克隆实验显示联合用药后,MCF-7、T47D细胞克隆形成能力明显下降；划痕实验结果表明联合用药可明显抑制MCF-7和T47D细胞的迁移能力；联合基因芯片检测结果表明联合用药可明显改变乳腺癌细胞MCF-7生存及死亡信号通路相关mRNA表达情况；Hoechst33342染色结果显示联合用药可诱导乳腺癌细胞MCF-7、T47D的凋亡,同时流式细胞术检测结果表明联合用药主要促进乳腺癌细胞的晚期凋亡；Western

blot结果显示BEZ235及TSA联合用药可进一步下调PBK/Akt/mTOR信号通路蛋白,上调PARP蛋白的表达及降低Bcl-2/bax比值,通过促进caspase-3、8、9蛋白的活化诱导凋亡；同时,联合用药可增加自噬标志蛋白LC3B、Beclin1的表达,经过自噬抑制剂3-MA处理30分钟后,联合用药组的LC3B表达下降,而caspase3和PARP的表达明显增强。结论：1)BEZ235与TSA联合用药可协同抑制乳腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移能力：2)BEZ235与TSA联合用药对乳腺癌细胞的协同抑制作用与PI3K/Akt/mTOR通路进一步抑制有关；3)BEZ235与TSA联合用药协同抑制乳腺癌的作用与依赖caspase途径诱导凋亡和促进自噬形成均密切相关。
研究背景肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,近年来发病率呈持续上升趋势,严重威胁人类生命健康。肾细胞癌常发病隐匿,约30%肾细胞癌在初次诊断时已发生转移。肾细胞癌对放化疗不敏感,根治性手术切除是其唯一有效的治疗方式,但是术后肿瘤复发转移率仍较高。肾细胞癌转移(metastatic renal cell carcinoma, mRCC)预后不良,5年生存率<0.001,P<0.

5、15、30、60、120 mg/L)能浓度依赖性地抑制HSCs增殖及I型α1前胶原(procollagen, type I, alpha1,Col Iα1)、III型α1前胶原(procollagen, type III, alpha1,Col IIIα1)、Col I和Col III的转录、合成和分泌。 4. PAE在转录和合成水平抑制HSCs中Smad3的表达 RT-PCR和Western blotting显示PAE对TGFβ1-Smads信号转导通路中的Smad2、Smad4和Smad7无明显作用,而对Smad3具有浓度依赖型性的抑制。提示,抑制Smad3转录和合成可能是PAE抗血吸虫病肝纤维化的机制之一。 结论: 1. TGFβ1可促进小鼠日本血吸虫病肝纤维化; 2.早期给予PAE可预防小鼠日本血吸虫病肝肉芽肿、肝纤维化的形成和TGFβ1表达; 3. SEA可刺激PMs分泌TGFβ1,后者可促进HSCs增殖和胶原分泌; 4. PAE预防血吸虫病肝纤维化可能与下述机制有关 a)抑制PMs分泌TGFβ1 b)抑制HSCs的增殖 c)通过抑制Smad3 mRNA的表达抑制HSCs产生胶原 点击此处 总之,在血吸虫病肝纤维化中,SEA能刺激巨噬细胞产生TGFβ1,后者可使HSCs增殖和分泌胶原。PAE通过抑制巨噬细胞分泌TGFβ1、HSCs的增殖、Smad3的转录和合成而最终抑制胶原的产生,发挥其抗纤维化的作用。以上研究结果将为PAE开发成治疗血吸虫病肝纤维化中药新药提供了实验依据。
TGFβ家族的信号转导由TGFβ受体ALK4或ALK7介导,在脊椎动物胚胎的中胚层和内胚层诱导以及神经外胚层的前-后轴线分化中起着重要作用。母体来源的这些TGFβ信号在胚胎发育的什么时期被激活、如何影响胚胎的发育,一直没有明确的答案。

SB-431542是一种小分子化合物,在培养的哺乳动物细胞中的实验表明,它能够特异性地阻断ALK4、ALK5、ALK7介导的TGFβ信号的转导。本研究证明,SB-431542在斑马鱼体内同样可以特异性地抑制ALK4、ALK7介导的TGFβ信号。主要证据包括:首先,SB-431542处理的斑马鱼胚胎在表型上与Nodal缺失的突变体的表型类似;其次,SB-431542可以抑制响应Activin/TGFβ的荧光酶报告系统在斑马鱼体内的表达,而对响应ΒΜP的荧光酶报告系统在斑马鱼体内的表达则无抑制作用;第三,SB-431542可以抑制在斑马鱼体内过量表达activin或sqt对中胚层标记基因的诱导作用,但不抑制过量表达bmp2对腹部外胚层标记基因gata2的诱导作用;第四,在SB-431542存在的情况下,过量表达smad3a和smad3b引起的gsc的表达增强受到抑制;第五,SB-431542处理导致的表现型可以被持续激活型的Smad2蛋白所逆转。

为了确定斑马鱼中母源TGFβ信号的激活时间,本研究用50μM SB-431542在中囊胚过渡期前(即合子基因开始表达之前)的不同时期处理胚胎,随后观察胚胎形态和检测分子标记的变化。结果说明,诱导中胚层发育的母源TGFβ信号在受精后就开始激活,并在合子基因表达之前不断地传导其信号。当用SB-431542短时间处理卵裂期胚胎,24小时的胚胎仍表现出中轴组织发育缺陷,说明合子基因表达前激活的母源TGFβ信号是胚胎正常发育所必不可少的。本实验还证明中囊胚过渡期前激活的母源TGFβ信号不足以保证胚胎的正常发育,其正常发育还需要中囊胚过渡期后激活的TGFβ信号。 时间 此外,本研究还从缺失Nodal信号的MZoep突变体、过量表达Nodal基因sqt的胚胎、以及野生型胚胎中提取mRNA,与斑马鱼基因芯片杂交,发现了许多受Nodal信号调控的基因,为深入研究Nodal信号调控胚胎发育的机理打下了基础。
研究背景及目的 也许 脓毒症(sepsis)是感染、严重创伤及大手术等多种应激状态时的常见并发症。近年随着滥用抗生素使耐药菌增多,介入性治疗及有创性监护增多,以及医院内感染的增多等因素,脓毒症死亡率居高不下,约28%～50%,合并休克及脏器功能不全时可达50%～70%,甚至很快死亡。儿科严重脓毒症和脓毒性休克(septic shock)至今仍处于高发病率、高病死率状态。2002年,国际儿科脓毒症共识会议专家组按严格科学的程序,首次在儿科界确定了脓毒症的相关概念[包括儿科全身炎症反应综合征、感染、脓毒症、严重脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合征(MODS)]。经3年实践,2005年1月发表。严重脓毒症由于病死率高(是美国儿童患病及死亡的主要原因之一)、治疗费用昂贵,已构成对人类健康的严重威胁和经济发展的巨大负担。 革兰阴性菌(G~-)感染是引起脓毒症的重要原因之一,其外膜的活性成分内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与宿主细胞膜上的模式识别受体模式识别受体TLR2和TLR4(toll-like

receptor,TLR)结合,启动一系列信号传导反应,引起多种细胞因子和炎症介质的表达和释放。众多实验研究证实前炎症细胞因子TNF-α(tumor necrosis factor-α)是脓毒症和脓毒性休克发病的重要介质,巨噬细胞是脓毒症TNF-α产生的主要来源。大量TNF-α的产生可引起多种细胞因子和炎症介质的过度表达和释放,诱发全身炎性反应,导致血管通透性增加、体液渗出和淋巴细胞移行到炎症部位,影响到心血管、呼吸、血液等多系统的功能。其中,肺是最普遍受影响的器官,脓毒症病人经常发展为急性肺损伤(acute lung injury,ALI)或者急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome,ARDS)。肺功能损伤使脓毒症病人必然伴随低氧的病理状态。低氧、低糖、高水平的炎症细胞因子和活性氧代谢产物等是炎症和损伤组织微环境的特点。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)是哺乳动物和人体内细胞存在着一类介导低氧适应性反应的转录因子,它的氧调节亚单位HIF-1α仅在低氧状态表达,能激活许多低氧反应性基因(hypoxia responsive genes,HRG)的表达。尽管低氧与脓毒症相关,对TNF-α的产生是否与脓毒症低氧过程及HIF-1α诱导相关,这些问题只有很少的研究。 p38 MAPK(mitogen activated protein kinase)被认为是“应激诱导”的MAPK,可在转录和转录后水平调控TNF-α表达,在LPS诱导的TNF-α信号传导通路中占据重要地位,抑制p38通路有希望成为炎症性疾病的新的治疗策略。以SB203580为代表的吡啶异咪哒唑化合物是p38 MAPK的特异性抑制剂,但是对其体内应用效果却仍然存在争议。对氧浓度是否参与p38激活的报道较少见。 本研究通过培养小鼠巨噬细胞RAW264.

020,r=0.138), p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log Selleckchem MK-2206 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化4EBP1和S6K1在细胞浆中表达增高可能与乳腺癌的发生相关。p-4EBP1的表达可能是维、汉民族之间差异的原因之一；4EBP1和S6K1的表达不能作为乳腺癌预后的独立指标。

第二部分：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白表达在转录水平的调控研究 目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白在新疆维汉乳腺浸润性乳腺癌组织中的表达情况,以及是否受其相应mRNA表达的调控。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织与癌旁组织病理切片,使用免疫组化方法染色,通过染色结果评价磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用Western-blot蛋白检测方法检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。随机收集2012年1月至2012年6月期间126例就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的新鲜乳腺癌及癌旁组织标本,使用荧光定量rtPCR方法检测mTOR、4EBP1和S6K1在癌组织和癌旁组织中的mRNA水平并进行对照研究。结果：新疆维、汉族浸润性乳腺癌组织和癌旁组织病理切片中p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),p=0.001;

BI 6727溶解度 p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,P值均小于0.01,差别均有显著统计学差异,p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织。Western-blot结果提示p-mTOR在癌组织中表达的灰度平均值是1.490,癌旁组织是0,p=0.001;p-4EBP1在癌组织中表达的灰度平均值是1.759,癌旁组织是1.676,p=0.725;p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值是4.407,癌旁组织是3.657,p=0.473,三者在癌组织中的表达均高于癌旁组织。mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是14.83、19.78,

t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。结论:mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,该信号通路在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA在癌组织中的表达未见明显增高,其相应蛋白质表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。 第三部分：mTOR信号及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉不同民族浸润性乳腺癌中表达的差异研究目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维吾尔族和汉族浸润性乳腺癌组织中的表达差异情况。方法：随机选取285例于2005年3月1日-2009年9月30日就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织病理资料,使用免疫组化方法检测磷酸化的mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况；选取63例维、汉新鲜乳腺癌组织样本,使用荧光定量rtPCR方法进一步检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的mRNA表达状况。结果：免疫组化染色结果显示,在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), 以及 p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020),p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：在mTOR信号通路中,p-mTOR和p-S6K1蛋白的表达无明显维、汉民族差异,而p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,且存在统计学差异,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异及个体化治疗的新方向。维、汉之间mTORmRNA表达水平存在差异,但因P值接近0.

7稳转细胞系，在VSV刺激后，miR-93无法调控JAK/STAT通路及其下游而发挥抗病毒作用，进一步证实miR-93靶向作用JAK1来调控I型干扰素通路从而影响病毒的复制。 第四部分：病毒感染后机体表达miR-93调控JAK/STAT通路及其体内的效应研究 为了进一步验证miR-93的体内效应，我们合成了胆固醇修饰的miR-93体内运载试剂Agomir-93(广州市锐博生物科技)，并通过尾静脉注射使小鼠体内高表达miR-93。实验结果发现，小鼠体内高表达miR-93后感染VSV病毒，可显著降低肝、肺、脾中的JAK1蛋白表达；肺部组织切片分析显示，miR-93高表达后肺中的有核细胞数显著增加，肺泡结构不清，损伤加重；而肝脏和脾脏中的病毒负荷明显提高；但血清中IFN-β的量与对照组相比没有变化。以上体内试验反证说明机体感染病毒后可通过上述机制下调miR-93表达从而增强I型干扰素下游信号发挥抗病毒效应。 综上所述，生物体遭受RNA病毒感染后，机体可适应性降低miR-93的表达，反馈增强I型干扰素下游信号发挥抗病毒作用，成为机体发挥抗病毒作用的新机制。
皖南花猪是优良的安徽省地方猪种，其优点主要在于肉质好和繁育性能强。脂肪组织不仅是一个储存脂肪组织。脂联素（Adiponectin,Adp）是由脂肪组织分泌的细胞因子，到目前为止它是唯一伴随脂肪变多而它的血液浓度却是降低的细胞因子。本实验通过分析肾周脂肪、皮下脂肪中脂联素及其受体基因水平差异，旨在探讨脂联素和皖南花猪肉质的内在关系。研究重组脂联素对肌内脂肪细胞的作用，探讨脂联素对猪肉质的影响和作用机制。

也许 1皖南花猪脂肪组织中脂联素及其受体基因的表达 从皖南花猪繁育中心挑选4头皖南花猪试验，常规条件下饲养。养至90d屠宰，屠宰前禁食12h，采集皮下脂肪组织和肾周脂肪组织，采用相对定量实时荧光PCR方法检测中脂联素（Adp）、脂联素受体1（AdipoR1）、脂联素受体2（AdipoR2）mRNA表达。结果显示： （1）Adp mRNA在皮下脂肪的表达显著高于肾周脂肪（P<0.05）；AdipoR1、AdipoR2mRNA在皮下脂肪的表达极显著（P
目的 BIBF 1120数据表 1.研究四妙勇安汤对糖尿病后肢缺血大鼠的治疗作用；

2.研究四妙勇安汤对糖尿病后肢缺血大鼠Akt、p38MAPK蛋白表达水平的影响； 3.探讨糖尿病下肢缺血模型的建立及评估。 方法 1.40只Wister大鼠分为随机四组：对照组、对照治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组，对照组、对照治疗组建立单纯后肢缺血模型；糖尿病组、糖尿病治疗组建立糖尿病后肢缺血模型，对照组、糖尿病组给于溶药蒸馏水灌胃，对照治疗组、糖尿病治疗组给予四妙勇安汤灌胃治疗； 2.分别于术前、术后即刻、术后3、7、14天监测下肢血流变化，术后15天取腓肠肌组织免疫组织化学CD31染色血管内皮细胞观察新生血管密度，及Western Blot法检测内皮细胞Akt、p38MAPK蛋白变化情况。 结果 1.糖尿病组、糖尿病治疗组大鼠腹腔注射链脲佐菌素后3天后空腹血糖明显较对照组、对照治疗组增高，7天后空腹血糖达稳定水平，对照组、对照治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组分别为：腹腔注药后3天：6.24±0.45mmol/L、6.10±0.37mmol/L、24.87±4.47mmol/L、26.09±3.95mmol/L；腹腔注药后7天：6.60±0.87mmol/L、6.17±0.39mmol/L、26.77±3.60mmol/L、28.10±4.15mmol/L（对照组、对照治疗组比糖尿病组、糖尿病治疗组，P<0.05）；糖尿病组术后15天血管密度明显减低，Akt蛋白表达明显降低，p38MAPK蛋白表达明显升高，差别均有统计学意义（对照组、对照治疗组比糖尿病组，P<0.05），并增加毛细血管密度（个）（糖尿病组、糖尿病治疗分别为9.1±2.0、16.4±2.9，P<0.05）；四妙勇安汤增加Akt蛋白表达，降低p38MAPK蛋白表达，差别均有统计学意义（糖尿病组与糖尿病治疗组蛋白相对光密度比值：Akt：0.20±0.07、0.28±0.56；p38MAPK：1.18±0.23、0.99±0.04，P
目的：探讨九节龙全草提取物九节龙皂苷-Ⅰ（Ardipusilloside-I，ADS-I）对体外培养人脑胶质瘤U87细胞在侵袭、迁移等生物学特征的影响及其可能的作用机制。方法：体外无菌培养人脑胶质瘤U87细胞，以不同浓度（0、2、4、8、16、32μM）的ADS-I作用于U87细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验观察ADS-I在不同作用时间（24、48、72h）对U87细胞增殖的影响；采用Transwell小室侵袭迁移模型，于小室底部铺上含50mg

可能 L-1的基底胶模拟人体内基底金属膜，给予不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）作用于体外培养的U87细胞，24h后观察细胞侵袭能力的改变；于六孔板中采用细胞划痕实验观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）在不同时间点（0、6、24h）对体外培养的U87细胞迁移能力的影响；采用明胶酶谱法，通过含有1g L-1明胶的8%丙烯酰胺凝胶中观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）对U87细胞所分泌的基质金属蛋白酶（Matrix-metalloproteinase，MMPs）活性的影响；采用细胞免疫化学的方法，通过相应的抗体抗原结合，观察不同浓度的ADS-I（1、3、5μM）作用U87细胞后，细胞内MMPs在相应抗体下的阳性反应。结果：从MTT实验中观察到U87细胞在一定浓度的ADS-I作用下被抑制生长，并且这种抑制作用随着作用时间及药物浓度的增加而增加，ADS-I作用24h、48h、72h后的U87细胞的半数抑制浓度（50%inhibitingconcentration，IC50）分别为8.02±0.16μM、6.63±0.10μM、5.41±0.

MEK-2、p-ERK、ER-β和MMP-2在EMs异位内膜中的表达显著高于在位内膜；TNF-a在EMs异位内膜与在位内膜中表达无差异。 2.MEK-2、p-ERK、ER-β、TNF-α和MMP-2在EMs异位内膜和在位内膜中的表达显著高于正常子宫内膜、单纯卵巢囊肿和正常卵巢组织。 3.MEK-2与p-ERK、ER-p、TNF-α、MMP-2的表达呈正相关,p-ERK与ER-β、 TNF-α、MMP-2的表达亦呈正相关。 结论： 1. MEK-2、p-ERK在EMs异位内膜及在位内膜中过表达,提示ERK信号通路与EMs发病有关,这条通路与EMs的增殖和侵袭相关。 2. ER-β、TNF-α、MMP-2在EMs异位内膜及在位内膜中表达升高,且与MEK-2、p-ERK的表达呈正相关。提示ERK信号通路与ER-β、MMP-2、TNF-α之间存在一定的相互作用网络,共同参与到EMs形成的病理生理过程中。ERK信号通路可为EMs治疗提供新思路,MEK-2、p-ERK和ER-β有可能成为EMs治疗的新靶点。
目的：建立新生大鼠高胆红素血症模型，探讨静脉注入胆红素对脾髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor88，MyD88）和磷酸化p38MAPK（phospho-p38MAP selleck Kinase，p-p38MAPK）蛋白表达及凋亡的影响。方法：⒈实验分组：选用144只清洁级7～8d新生SD大鼠，雌雄不限，体重12.0～15.0g，随机分为空白对照组（Ⅰ）、脂多糖对照组（LPS，Ⅱ）、15mg/kg胆红素对照组（Ⅲ）、15mg/kg胆红素+LPS组（Ⅳa）、30mg/kg胆红素+LPS组（Ⅳb）和50mg/kg胆红素+LPS组（Ⅳc），共6组，每组24只，每组又分为2h、5h、24h三个时间点，每个时间点8只。⒉建立新生SD大鼠高胆红素血症模型：⑴乙醚麻醉新生SD大鼠，酒精消毒颈部，暴露一侧颈静脉，给予不同剂量胆红素（15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg）颈静脉注入；空白对照组和LPS对照组给予生理盐水0.1ml颈静脉注入；缝合颈部切口；⑵在颈静脉注入1h后，空白对照组和15mg/kg胆红素对照组给予生理盐水0.05ml腹腔注入，不注射LPS；其余各组1h后给予LPS1mg/kg腹腔注入；⑶分别于颈静脉注入后2h、5h、24h采血，测血浆胆红素浓度；⑷处死动物，4％缓冲甲醛心脏灌注做内固定后快速取脾脏，固定、脱水、透明、包埋制成石蜡标本，采用免疫组织化学法检测脾MyD88和磷酸化p38MAPK蛋白的表达，TUNEL染色原位法检测脾细胞凋亡情况。结果：⒈新生SD大鼠在注入胆红素5～10min后皮肤出现不同程度的黄染，呈金黄色，1h后皮肤黄染减退；在注入1h时，15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组血浆总胆红素浓度95％的置信区间分别为：（106.31，123.49）μmol/L、（196.58，238.90）μmol/L和（325.15，349.07）μmol/L，且胆红素注入剂量与血浆总胆红素浓度呈正相关（rs=0.9452，P＜0.01）。⒉胆红素对脾MyD88蛋白表达的影响：⑴低浓度范围（106.31，123.49μmol/L）的胆红素和LPS单独作用可以促进脾细胞MyD88的表达（P＜0.01），但胆红素弱于LPS的促进作用（P＜0.01）；5h即可观察到胆红素的这种促进作用，24h作用消失；⑵低浓度范围的胆红素对LPS刺激MyD88表达的影响不明显（P＞0.05）；⑶中、高浓度范围[（196.58，238.90）和（325.15，349.07）μmol/L]的胆红素对LPS刺激MyD88表达有抑制作用（P＜0.01），且随着浓度的升高，抑制作用增强；2h即可观察到这种抑制作用，5h作用明显，24h时中等浓度范围的胆红素的抑制作用消失，高浓度范围的抑制作用仍然存在（P＜0.01）。⒊胆红素对脾p-p38MAPK蛋白表达的影响：⑴低浓度范围的胆红素和LPS单独作用可促进脾细胞p38MAPK的磷酸化（P＜0.01），但弱于LPS的促进作用（P＜0.01）；2h即可观察到胆红素的这种促进作用，5h作用增强，24h作用仍存在；⑵中、低浓度范围的胆红素对LPS刺激p-p38MAPK表达有抑制作用（P＜0.01），且浓度越高，抑制作用越明显；2h即可观察到这种抑制作用，5h作用增强，24h作用消失；⑶高浓度范围的胆红素对LPS刺激p-p38MAPK表达有促进作用（P＜0.01）；5h时即可观察到这种促进作用，24h作用减弱。⒋MyD88和p-p38MAPK与胆红素浓度的相关分析结果：⑴2h、5h和24h的MyD88IOD（SUM）值与胆红素浓度呈负相关（r分别为：－0.856、－0.791和－0.875，P＜0.01），即随着胆红素浓度的升高，抑制脾细胞表达MyD88的作用越明显；⑵2h的p-p38MAPK

查看更多 可能 IOD（SUM）值与胆红素浓度无相关关系（r=－0.123，P＞0.05）；5h的p-p38MAPK IOD（SUM）值与胆红素浓度呈正相关（r=0.897，P＜0.01）；24h的p-p38MAPK IOD（SUM）值与胆红素浓度呈正相关（r=0.827，P＜0.01）。表明在5h和24h时，随着胆红素浓度的升高，p-p38MAPK的表达有增加的趋势。⒌胆红素对脾细胞凋亡的影响：⑴低浓度范围的胆红素组凋亡率增加（P＜0.01）；⑵中、低浓度范围的胆红素与LPS共同作用可减少脾细胞凋亡（P＜0.01）；高浓度范围的胆红素与LPS共同作用可使细胞凋亡增多（P＜0.

86%,3度及以上中性粒细胞减少发生率为55.81%,非血液学毒性主要为腹泻及恶心或/和呕吐,3度及以上腹泻发生率为20.93%,3度及以上恶心或/和呕吐患者发生率为18.66%。一线EP二线IP组患者的总生存期(OS)为10.0个月,一线IP二线EP组患者的总生存期(OS)为25.1个月,一线EP二线IP化疗组患者和一线P二线EP化疗组患者的OS存在显著差异(P=0.021)。3度及3度以上的血小板减少在一线EP二线IP组发生率较高,两组之间有显著性差异(P=0.01)。

结论：伊立替康联合顺铂治疗小细胞肺癌疗效确切,毒副反应可以耐受。对于小细胞肺癌来说,一线IP二线EP可能较一线EP二线IP更有生存优势,毒性可以耐受,该结论需要更多样本的进一步临床研究。
目的：检测FXYD3在人结肠癌中的表达，探讨FXYD3蛋白的表达和结肠癌患者临床病理参数之间的关系。 方法：应用免疫组织化学SP（Streptavidin-perxiodase，链霉素抗生素蛋白-过氧化物酶）法检测结肠癌60例、癌旁正常组织34例、远离肿瘤正常组织20例的FXYD3蛋白表达，并采用RT-PCR方法检测其中13例结肠癌及其远离肿瘤的正常组织FXYD3mRNA表达。收集患者临床病理资料及术后MDR、p21、p53、ki67蛋白免疫组化结果，探讨FXYD3蛋白的表达和结肠癌患者临床病理参数之间的关系。 寻找更多 结果：FXYD3蛋白染色阳性定位于细胞膜和（或）细胞质，在远离肿瘤正常组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为100%（20/20）、85.29%（29/34），显著高于在结肠癌组织中的阳性率50%（30/60）（P＜0.05）。FXYD3mRNA在结肠癌中表达低于在远离肿瘤正常组织的表达（P＜0.05）。同一结肠癌中免疫组织化学检测FXYD3蛋白量和RT-PCR检测FXYD3mRNA的相对表达量呈正相关（r=0.493），但无统计学意义（P>0.05）。FXYD3蛋白表达随组织学分级增高而降低（P＜0.01）；Dukes分期越晚，FXYD3蛋白表达越低（P＜0.01）；有淋巴结转移组比无淋巴结转移组FXYD3蛋白表达率低，且有统计学意义（P＜0.01）。FXYD3蛋白与p21蛋白、MDR蛋白表达呈正相关，但无统计学意义（P＞0.05）。而FXYD3蛋白与p53蛋白表达呈正相关（r=0.29446），FXYD3蛋白与ki-67蛋白表达呈负相关（r=－0.30376），均有统计学意义（P＜0.05）。 结论：在人结肠癌中FXYD3mRNA和蛋白均较正常结肠组织表达下降，结肠癌中FXYD3mRNA减少引起翻译生成的FXYD3蛋白质减少，FXYD3蛋白表达与结肠癌组织学分级、Dukes分期及淋巴结是否转移有关，且FXYD3蛋白表达与p53呈正相关及与ki-67呈负相关。
目前砷污染仍是影响人类健康的重要威胁，全球大约有1亿人口正面临着砷污染的威胁，其中大多数为不发达国家、地区，而中国是砷污染危害最为严重的国家之一。通过饮水、燃煤、药物、职业等方式长期暴露于砷污染，可引起皮肤、肺和膀胱等多种组织器官发生肿瘤。近年来对砷的代谢、砷角化病、砷致癌机制进行的探索研究发现，与活性氧、DNA修复和甲基化模式的改变相关，并建立了多种转基因细胞和动物模型，但具体机制仍不清楚。我国是地方性、职业性和医源性砷中毒较为严重的国家，含砷制剂至今仍是一些中成药的重要组分，如何正确使用同时加强砷致病机制的研究具有重要的科学意义。

17-AAG浓度 皮肤是慢性砷中毒的重要靶器官，长期砷中毒可导致多种皮肤肿瘤的发生。除了对患者的观察研究、建立转基因动物模型，砷刺激角质形成细胞的体外培养也是研究砷致癌机制的重要模型。近年皮肤发育、增生和肿瘤性疾病发生的基础研究主要集中在几个重要的信号传导通路上，如Hedgehog、Notch、Wnt和EGFR相关通路。我们在砷影响皮肤角质形成细胞增殖、分化的信号通路方面进行了多年研究，结果显示不同浓度As_2O_3对靶细胞产生双相效应，高浓度的As_2O_3抑制角质形成细胞增殖、诱导细胞凋亡；低浓度（<0.05）其中尤以Gli1mRNA差异明显，增高4倍以上。（P
第一部分DEN诱导大鼠肝癌模型的代谢组学研究

[研究目的] 肝细胞性肝癌(简称肝癌,Hepatocellular Carcinoma, HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,目前的研究认为：肝炎病毒感染及其他致癌因素是肝癌发生的主要外因。同时,肝癌和其它恶性肿瘤一样,其发生发展是由体内多基因多蛋白参与、多步骤协同的复杂过程。寻找肝癌发生、发展过程中的相关代谢产物有助于研究肝癌发生及发展的机制,从而为肝癌的预防、诊断及治疗提供理论基础。 组学概念的提出为研究者提供了一个整体研究疾病的新思路,基因组学、转录组学、蛋白组学等已经不为大家所陌生,作为系统生物学最下游的代谢组学,是一门新的科学,主要研究生物体对病理生理刺激或基因修饰所产生代谢物的质和量的动态变化规律。这种整体的研究模式可全面了解代谢物质在疾病发生、发展过程中的变化规律,对发病机制研究以及疾病的诊断、治疗和疗效评估具有重要意义。因此,我们采用该理论,结合现代生物质谱技术,对DEN诱导大鼠肝炎—肝硬化—肝癌模型以及慢性肝炎、肝硬化和肝癌病人进行代谢组学研究。 本研究拟首先通过DEN诱导建立大鼠肝炎—肝硬化—肝癌动物模型,观察在不同发展阶段血浆代谢小分子的变化情况,从中找出不同发展阶段大鼠血浆中潜在的代谢物分子标签；然后对模型肝脏组织进行代谢组研究,并与疾病的发展阶段进行关联；最后将这些代谢物分子标签在人血浆中进行验证,观察其对肝癌的预测能力。 selleck中国

selleck

selleck好不好 [研究方法] 1.建立DEN诱导大鼠肝炎—肝硬化—肝癌模型； 2.模型不同阶段大鼠血浆的代谢组检测； 3.基于大鼠血浆代谢组的预测模型建立； 4.潜在大鼠血浆代谢产物分子标志物的筛选及鉴定； 5.模型不同阶段大鼠肝脏组织的代谢组检测； 6.基于大鼠肝脏组织代谢组的预测模型建立； 7.潜在血浆代谢产物分子标志物在肝炎、肝硬化、肝癌病人血浆中的验证及筛选。 [结果] 1.DEN诱导的大鼠肝癌模型可以很好的模拟人肝炎—肝硬化—肝癌的发展进程； 2.大鼠血浆的代谢组检测发现相对于NC组而言,DEN组大鼠在炎症期、硬化期及肝癌期,分别有382个、427个以及445个代谢物离子有显著性差异,其中又分别有253个、330个以及383个代谢物离子升高； 3.基于大鼠血浆代谢组数据建立的PLS-DA分析模型,计算出5个主成份,前两个主成份可以分别表示致癌过程及年龄增长的代谢物变化； 4.基于肝癌阶段与非肝癌阶段代谢组数据建立的OPLS模型,筛选出对模型贡献最大的50个变量,其中一半与HCC正相关,另一半与非HCC正相关； 5.用这50个代谢产物另外建立PLS-DA模型,计算出两个主成份,模型能够很好地区分炎症期、硬化期和肝癌期三个阶段； 6.对50个代谢产物进行鉴定,发现包括氨基酸、胆汁酸、磷脂、游离脂肪酸、神经鞘氨醇以及肉碱等； 7.

作用于细胞表面的外界刺激通过细胞膜上特异受体的介导启动胞内复杂的信号通路.多条信号通路的相互作用,多种信号分子的相互交谈,形成了一个复杂的信号网络,使细胞对各种刺激作出迅速、准确的响应.
目的大量的临床研究和动物实验发现尿蛋白可直接导致肾小管间质受损,然而其机制仍未完全明了,对蛋白尿导致小管间质损害也无有效的治疗手段。因此,本研究拟探讨以下问题:(1)白蛋白是否诱导肾小管上皮细胞凋亡以及诱导凋亡的信号传导机制;(2)牛磺酸是否对白蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用;(3)大量持续性蛋白尿病人是否发生肾小管上皮细胞凋亡。方法将培养的雄大鼠肾小管细胞NRK-52E分别与不同浓度(10、20、30mg/ml)的去脂无内毒素牛血清白蛋白(BSA)共同孵育6、12、18和24小时。进行台盼蓝排除试验,确定坏死细胞少于10%,

MAPK在细胞增殖、分化及应激过程中具有重要作用。近年研究发现缺血/缺氧后也可引起MAPK激活,然而不同研究中激酶激活种类、程度、时程及作用上差别很大。本研究在缺氧/复氧诱导的培养海马神经元损伤模型上,采用Western

一般 blotting和药理学方法,观察了缺氧/复氧后MAPK 激活及不同激酶相应抑制剂的保护作用。复氧后p38、JNK及ERK三种激酶均有激活,但其激活的时程不同:复氧后立即可检测到p38激酶磷酸化水平显著增高,此后迅速下降,至复氧3h已恢
一、免疫调节机制对卫生学假说提出的挑战:支气管哮喘(简称哮喘)作为一种免疫调节异常的疾病已经取得了普遍的共识。有关哮喘免疫调节紊乱的机制,得到最广泛关注的有著名的“卫生学假说”。卫生学假说的核心是Th1/Th2细胞因子的平衡学说,亦即Th1/Th2细胞所产生的细胞因子有互相制约彼此表型的分化和功能的特性。当Th1细胞占优势时,就会抑制Th2细胞的功能。如果婴幼儿时呼吸系统或消化系统受到感染,比如结核病、麻疹、寄生虫病甚至甲型肝炎病毒感染等,有可能通过巨噬细胞产生α干扰素和白细胞介素12,继而刺激NK细胞产生γ干扰素,后者可增强Th1细胞的发育,同时抑制Th2

细胞的活化。从而抑制变态反应…
The health benefits associated with tea consumption have been corroborated in animal studies of cancer chemoprevention, hypercholesterolemia, artherosclerosis, neurodegenerative diseases and other age-related disorders. Recent studies have been demonstrated that some fermented teas such as black,…
Epstein-Barr 还有 virus (EBV) reactivation into the lytic cycle plays certain roles in the development of EBV-associated diseases.Recent investigators have demonstrated that Epigallocatechin-3-0-gallate (EGCG),the major polyphenol found in green tea,inhibits TSA-induced EBV lytic replication in
骨关节炎(osteosrthritis,OA)的病理生理是合成代谢与分解代谢不平衡的结果。这种不平衡是炎症介质、基质成分以及机械压力引起关节细胞活化而产生的结果。所有这些介质通过特殊的受体起作用,这些受体传递信号给细胞核而激活基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)和介质基因的转录,因此
目的研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源肺腺癌细胞系A549细胞人β防御素2(humanβdenfensin 2,hBD2)的表达及机制。方法

Tariquidar溶解度 SP以不同感染分数(0、1、20、50)或不同感染时间(0h、2h、4h、6h、8h、12h、18h、24h)诱导A549细胞,并以TLR2功能性抗体、MAPKs信号分子抑制剂预处理SP感染的A549细胞,CCK-8法检测细胞活力,Western Blot检测细胞磷酸化MAPKs水平,qRT-PCR法检测hBD2 mRNA表达,ELISA法检测hBD2蛋白水平。
p38 mitogen-activated protein kinases(p38 MAPK,p38)consist of 4 subunits:p38a,p38b,p38gand p38d.They play a well-recognized role in regulating intracellular signaling transduction in mammalian cells.p38 MAPK induces a variety of intracellular responses associated with neuropathic pain and other chro…
Object:The poor survival of mesenchymal stem cells(MSCs)transplanted into infarcted heart is a limit to improvement of heart function and neovascularization after myocardial infarction.

79×102Da,旋光度为[α]D20-48.62°(c0.1, H2O),总糖含量为57.18%,酸性多糖含量为12.39%,SO42-含量为29.75%。HS-4的理化性质为：分子量为4.23×105Da,总糖含量为38.12%,酸性多糖含量为16.52%,硫酸根含量为32.64%,单糖组分主要以岩藻糖为主,还含有小部分半乳糖,不含蛋白质和核酸。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 从胎龄为E14.5d胚胎大脑皮层中提取的神经干细胞,在含有外源性生长因子bFGF和EGF存在的条件下细胞会分裂增殖,聚集成团,即神经细胞球。经鉴定提取的神经干细胞BrdU染色呈阳性,Nestin荧光染色呈阳性,经含.2%胎牛血清诱导后可以分化为星形胶质细胞(GFAP阳性)和神经元细胞(TUJ1阳性)。HS-3能诱导神经球在末铺P-L-L的培养板中粘附和迁移,迁移距离呈现浓度依赖性,在80μg/mL

HS-3作用72h后,神经球的迁移距离为438μm。HS-3还能有效维持神经球在撤离生长因子后细胞的存活。在HS-3的刺激下，神经干细胞能分化为神经元和星形胶质细胞,浓度增加,分化为神经元的比例增大；且更有意义的是分化的神经元细胞能沿着神经球轴线向外迁移,而分化的星形胶质细胞滞留在神经球中,。PD98059和Noggin对HS-3介导的细胞迁移没有影响,而LY294002能有效抑制神经球的迁移(P
糖皮质激素是治疗炎症及自身免疫性疾病的常见药物。内源性及外源性合成的糖皮质激素均能有效抑制炎症反应,纠正炎症反应的失衡,避免过度或持续炎症所引起的组织损伤。正由于疗效显著,糖皮质激素数十年来一直应用于临床一线,广泛用于败血症性休克、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎和多发性硬化症等炎症相关性疾病的治疗。然而,由于长期使用所带来的副作用及日益增加的耐药性,糖皮质激素的临床效能正面临前所未有的挑战。因而,深入研究和进一步阐明糖皮质激素的作用机理是一项重要的科学问题。 PS-341供应商 Selleckchem BAY 73-4506 长期以来广为人们认可的糖皮质激素作用机制是基因组学说,即：通过与糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)结合形成复合物,转位进入细胞核后,与靶基因启动子区域糖皮质激素反应元件(Glucocorticoid responsive element,GRE)结合或者与转录因子相互作用,从而直接或间接调控靶基因的转录。以往的研究主要聚焦在信号分子及炎症介质等蛋白编码基因上,而对于与基因表达异常关系密切的非编码序列如microRNAs

(miRNAs)的作用则知之甚少。 近年来,miRNA已成为基因表达调控的“明星”分子。它们由细胞内核基因组转录为RNA,经过Drosha和Dicer酶剪切加工后,成为成熟的miRNA。成熟miRNA的种子序列可与靶基因mRNA的3’端非编码区互补结合,导致mRNA降解或者蛋白翻译抑制。越来越多的证据表明：miRNA是机体内各种生理及病理活动的关键调节因子,并参与固有免疫应答及适应性免疫应答。Toll样受体(Toll

BI 6727半抑制浓度 like receptor, TLR)是固有免疫细胞重要的识别受体,可结合病原体的特定结构成分,从而激活免疫细胞。其中,TLR4信号通路的活化,诱导大量不同的miRNA,例如miR-146a,miR-147,let-7e,let-7i和miR-155表达上调等；而这些miRNA又可靶向抑制某些信号传导蛋白的表达,反馈调控TLR4信号通路的强度,从而促进或者抑制炎症应答。这些研究结果提示：miRNA在炎症应答中扮演着重要角色。那么,糖皮质激素是否调控miRNA的表达?miRNA是否参与糖皮质激素的抑炎作用?作用机制又如何?目前,均未见系统的研究报道。 有鉴于此,我们以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应模型为研究对象,利用基因芯片等技术系统分析了糖皮质激素地塞米松对miRNA表达谱的改变情况,并对糖皮质激素调控miRNA表达的机制、miRNA参与糖皮质激素抑炎的作用及分子机制展开研究,以期阐明糖皮质激素抗炎的非编码RNA机制,为后续的药物开发提供理论和实验基础。 第一部分糖皮质激素影响microRNAs在炎症反应中的表达 巨噬细胞是天然免疫系统的重要组成部分,在炎症反应中起十分关键的作用。巨噬细胞等炎症细胞渗出是炎症反应最主要的特征。渗出的巨噬细胞是一柄双刃剑,一方面,巨噬细胞被激活后,释放炎性介质,激活免疫系统,有效地杀伤病原体,构成炎症反应的防御环节；另一方面,巨噬细胞过度激活则释放过量炎性介质、蛋白水解酶及氧自由基等加重组织损伤并延长炎症过程。Raw264.7细胞是小鼠来源的单核巨噬细胞系,在受到LPS刺激时,可模拟机体炎症细胞的反应状态,已成为一种常见的炎症反应细胞模型被广泛应用于炎症领域的相关研究。 据此,我们首先以LPS刺激Raw264.

05)。5.大鼠脑缺血再灌注模型组P-AKT及P-GSK3β较假手术组升高(p<0.05),而丹参多酚酸盐干预后P-AKT及P-GSK3β表达升高较模型组更为显著(p0.05)。 结论:1.脑缺血再灌注后细胞凋亡增加,HSP22. P-AKT及P-GSK3β蛋白表达均高于对照组。2.丹参多酚酸盐可能通过增加大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中HSP22表达,同时升高P-AKT及P-GSK3β蛋白表达,抑制缺血再灌注后细胞凋亡,缓解细胞病理变化,减轻脑组织缺血再灌注损伤,而发挥神经保护作用。
目的利用DKK1重组蛋白干预染氟软骨细胞，观察干预前后染氟软骨细胞增殖及X型胶原的表达变化，探讨DKK1在氟性骨损伤骨周化骨病变中的作用及机制。 方法机械—酶消化法提取4周龄SPF级SD大鼠膝关节软骨细胞，分对照组和4个染氟组（5、10、20、40mg/L NaF溶液），MTT法测不同时段（24、48、72、96h）细胞增殖活性，ELISA测定细胞上清中COL-10及DKK1含量；取10mg/LNaF溶液剂量染氟72h的软骨细胞进行干预，分非干预组和3个干预组（1、2、4μg/L

RAD001数据表 DKK1重组蛋白PBS缓冲液），MTT法测各干预时段（0、12、24、36h）细胞增殖活性，ELISA测细胞上清中COL-10含量。 结果染氟软骨细胞MTT法检测结果显示，与对照组相比，在24h的5、10、20mg/L剂量组；48h时的5、10、20mg/L剂量组；72h时的5、10、20mg/L剂量组；96h时的10mg/L剂量组中细胞增殖活性明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。COL-10含量在不同时段各染氟剂量组与对照组相比，均显著升高（P0.05），48h时，仅10mg/L剂量组COL-10含量（254.10±23.01）ng/L显著高于5mg/L剂量组（230.36±12.50）ng/L（P0.05）；48h时，20mg/L剂量组DKK1含量（24.74±0.95）μg/L显著高于对照组（20.87±2.46）μg/L（P<0.05）；24h时，干预B组细胞增殖活性显著降低（P<0.05）；36h时，干预A组细胞增殖活性显著升高，C组则显著降低（P0.05）；干预24h后，干预B、C两组COL-10含量（209.79±14.42）ng/L、（216.68±16.66）ng/L显著低于非干预组（246.26±12.41）ng/L（P
背景：阿尔茨海默病(Alzheimer’s

很少 disease,AD)是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状（抑郁、焦虑不安、幻觉、妄想和失眠等）和行为障碍（踱步、攻击行为、坐立不安等）；主要病理特征是胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)、胞外老年斑(Senile Plaques, SP)的聚集及神经元进行性丢失等。过度磷酸化的tau是胞内神经原纤维缠结的最主要的成分。研究发现组蛋白去乙酰化酶2（Histone Akt抑制剂 deacetyltransferase-2，HDAC2）在AD病人脑中、AD转基因小鼠模型CK-p25和5xFAD及体外AD相关的神经毒性损伤模型中表达量均显著增加，并且其含量增加与部分学习记忆及突触可塑性相关蛋白表达量的下降密切相关，敲除HDAC2可以有效逆转AD转基因小鼠的神经退行性病变。但老年痴呆患者中增加的HDAC2与磷酸化的tau之间的关系尚不清楚。

目的：离体水平探讨HDAC2的水平升高与AD样tau蛋白过度磷酸化之间的关系及可能的机制。 方法：蛋白免疫印迹技术检测瞬时转染pEGFP-HDAC2于HEK293/tau细胞(人胚肾293细胞稳定转染人tau全长蛋白)内后微管相关蛋白tau的磷酸化水平的改变情况及tau磷酸化相关激酶和酯酶的蛋白含量和活性水平；免疫共沉淀检测HDAC2与GSK-3β之间是否有直接作用；细胞免疫荧光技术检测HDAC2和GSK-3β在细胞内的分布和定位情况。 结果： 1. HDAC2导致293/tau细胞中tau蛋白pT231、pS404位点过度磷酸化：过表达HDAC2明显增加了293/tau细胞中pT231、pS404位点磷酸化水平，分别至140.2%(p=0.017)和150.7%(p=0.0058)，总tau含量未发生改变； 2.同家族的HDAC1、HDAC3不改变tau磷酸化水平：过表达I型HDACs的其它两个成员HDAC1、HDAC3后293/tau细胞内pT231、pS396、 pS404、R134d含量均未变化（p>0.05）； 3. HDAC2激活GSK-3β使tau过度磷酸化：过表达HDAC2后检测t-GSK-3β、pS9-GSK-3β、pY216-GSK-3β后发现GSK-3β的抑制性位点磷酸化的s9蛋白水平降低而t-GSK-3β并无变化，此外，pS21-GSK-3α，t-GSK-3α的含量也并未发生改变，表明HDAC2过表达后激活GSK-3β，而非GSK-3α；同时检测其他tau磷酸化相关的激酶PKA、PKC、ERK及酯酶PP2Ac发现他们的蛋白水平和活性并没有随着HDAC2的过表达而变化，这些结果提示，HDAC2过表达引起的tau过度磷酸化可能是通过激活GSK-3β而不是PKA、PKC、ERK或PP2A起作用。pEGFP-N1-dnGSK与HDAC2共转后tau磷酸化水平没有上升（p>0.05）及转染HDAC2后给予GSK-3β抑制剂SB216763均不改变tau磷酸化水平进一步证明GSK-3β激活介导了HDAC2过表达引起的tau过度磷酸化。 4.

05),均未出现明显统计学差异,增大样本量有可能出现。模型组心脏体重指数高于假手术组(P<0.05),氯沙坦组明显低于模型组(P0.05)。川芎嗪组、Garlicin 1组的血浆中AngⅡ水平较模型组明显降低(P<0.05),四个治疗组与模型组相比出现明显的降低(P
血吸虫病是人类主要热带病之一。血吸虫病主要死于肝虫卵肉芽肿以及继发性的肝纤维化。有研究显示,杀虫治疗后未成熟虫卵仍可继续发育,血吸虫虫卵肉芽肿反应仍在继续,而且,一旦肝纤维化达到一定程度,即使去除了肝纤维化诱因,纤维化仍将继续发展。因此,如何在肉芽肿形成阶段和肝纤维化早期,用药物干预以预防其发展,是杀虫治疗后第二个控制疾病发展的关键。然而至今无高效低毒的药物用于血吸虫性肝病的治疗。 目前已证实,肝星状细胞(hepatic

stellate cells,HSCs)是分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM),引起肝纤维化最主要的细胞,转移生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGFβ1)是其最强的促ECM分泌因子。但TGFβ1对血吸虫病肝纤维化的影响,目前仍有争议。 芍药苷(paeoniflorin,PAE)是从白芍中提取的主要有效成分。以往的研究发现,芍药苷具有免疫调节、抗炎等作用,但其在日本血吸虫虫卵肉芽肿和肝纤维化中的作用,国内外未见报道。 很少 本课题用血吸虫尾蚴感染小鼠,制成血吸虫病肝肉芽肿和纤维化模型,考察PAE在体内对肝肉芽肿和纤维化以及TGFβ1的影响,然后在体外考察血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)分泌TGFβ1的影响,以及TGFβ1和PAE对HSCs增殖和分泌胶原的影响。最后从基因和蛋白表达水平探讨PAE对TGFβ1-Smads信号转导通路的作用,以期了解PAE抗肝纤维化的部分机制。 STI571体外 目的:研究PAE对小鼠日本血吸虫病肝纤维化TGFβ1-Smads信号转导通路的影响 方法:用血吸虫尾蚴经皮肤感染小鼠,然后在感染后不同时间,分先后或同时给予吡喹酮和不同剂量PAE,用组织芯片HE染色和免疫组化技术了解PAE在杀虫不同时期对肝肉芽肿、肝纤维化形成和TGFβ1表达的影响;用SEA刺激PMs,分别用反转录多聚酶链反应(reverse

transcriptase polymerase

chain reaction,RT-PCR)、Western blotting以及酶联免疫分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析SEA和PAE对PMs产生TGFβ1的影响;用原位灌流-密度梯度离心法提取正常健康小鼠HSCs,经SEA刺激的腹腔巨噬细胞条件培养基(stimulated peritoneal macrophage-conditioned medium,Stimulated-PMCM)刺激HSCs后,用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法和ELISA分别观察PMCM和PAE对HSCs增殖和分泌胶原的影响。我们选择稀释度为1:2的PMCM为最适浓度的巨噬细胞条件培养基(optimum macrophage-conditioned medium,OPMCM),然后,在OPMCM中加入抗TGFβ1单抗,以了解TGFβ1对HSCs增殖和胶原分泌的影响。最后,用RT-PCR和Western blotting分析PAE对HSCs中的Smads信号蛋白以及前胶原转录和合成的影响。 结果: 1.早期给予PAE可预防血吸虫病小鼠肝肉芽肿和肝纤维化的形成,降低肝内TGFβ1表达 感染血吸虫尾蚴后第12 d(在杀虫治疗前第30 d)开始给予PAE(30、120 mg/kg),能显著降低肝肉芽肿大小和肝纤维化程度,以及降低TGFβ1在肝组织中的表达,而在感染后第42 这个 d(在杀虫治疗同时)或第72 d(在杀虫治疗30 d后)开始给予PAE则无上述作用。说明血吸虫感染后,早期给予PAE能预防肝肉芽肿和肝纤维化;同时也说明,肝纤维化可能与TGFβ1的表达有关。 2. SEA促进PMs分泌TGFβ1,而PAE抑制TGFβ1的分泌 ELISA、RT-PCR和Western blotting都显示SEA(0、2.5、5、10、20、40 mg/L)能刺激PMs分泌TGFβ1,且SEA在10 mg/L时能刺激PMs产生最大量的TGFβ1;同时,RT-PCR和Western blotting显示,PAE(0、7.5、15、30、60、120 mg/L)能浓度依赖性地抑制PMs产生TGFβ1。提示PAE抗肝纤维化的机制可能与其抑制PMs分泌TGFβ1有关。 3.