kg~(-1)麻醉。(1)8-10周龄的雄性C57 BL/6小鼠随机分为肠缺血30min、40min、50min和60min,每组8只,观察14d内肠缺血再灌注后小鼠生存率。(2)小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注处理组(Ⅱ/R):分再灌注即刻(0)、0.5h、1h、4h、6h和12h不同再灌注时间组。夹闭SMA 40min再灌注造成小鼠Ⅱ/R模型,假手术组同样进行开腹手术但不夹闭动脉。假手术后及肠缺血再灌注后不同时间相处死小鼠取小肠标本,回肠组织10%中性福尔马林液固定待病理检查,用Chiu双盲病理评分,评价肠损伤情况程度;原位末端标记(TUNEL)法对肠组织凋亡细胞进行定位检测;全细胞裂解法提取小肠总蛋白,Western blot蛋白免疫印迹法检测小肠组织JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,磷酸化JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,以及与凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平,以磷酸化MAPKs蛋白代表其活化水平。 结果:(1)肠缺血30 min小鼠生存率100%,随着肠缺血时间的增加,动物生存率逐渐降低,肠缺血60 min动物生存率仅约30%。(2)肠组织大体表现及病理评分结果均显示,肠缺血40
min后再灌注早期肠损伤严重,尤以再灌注1h肠组织病理损伤最重,至12h肠组织结构基本恢复正常;TUNEL法定位凋亡细胞结果表明,凋亡细胞分布广泛,包括黏膜、黏膜固有层,黏膜下层,甚至肌层均存在凋亡细胞,涉及细胞成分多样,以肠上皮细胞凋亡为主。肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存。(3)肠缺血再灌注早期促凋亡的活化型caspase-3蛋白表达增加,与假手术组比较,再灌注0.5h、1h小肠组织活化型caspase-3明显增加(P＜0.01),与小肠组织病理损害时相过程基本一致,同时抗凋亡Bcl-2蛋白明显下调(P＜0.01);各组间促凋亡蛋白Bax表达无统计学差异。(4)肠缺血再灌注不影响肠组织JNK、ERK、p38
Verteporfin细胞系 MAPK蛋白表达,而磷酸化JNK、ERK、p38 www.selleck.cn/products/azd9291.html MAPK蛋白表达明显增加。与假手术对照组比较,肠缺血及再灌注早期,小肠组织JNK持续活化,差异有统计学意义(P＜0.01);肠缺血再灌注导致磷酸化ERK显著增加,至再灌注4h下降至接近正常,然后ERK活化再次明显增加(P＜0.01),ERK活化呈现明显上升-下降-再上升动态活化过程;肠缺血p38 MAPK活化明显减少(P＜0.05),再灌注0.5 h肠组织磷酸化p38 MAPK急剧上升(P＜0.01),其后p38 MAPK持续活化,尽管与假手术对照组差异无显著性。 结论:肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存;肠缺血再灌注早期小肠组织JNK、p38 MAPK活化、可能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,参与了Caspase-3依赖的细胞凋亡和组织损害,ERK的活化与受损肠组织及时修复有关。对进一步研究MAPKs信号通路活化在Ⅱ/R肠损伤中的作用具有指导意义。 第二部分p38 MAPK活化在肠缺血再灌注肺损伤的作用 目的:观察小肠缺血再灌注后肺组织p38 MAPK活化规律、以及肠和肺组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1β基因转录水平的变化,探讨p38 MAPK蛋白活化在小鼠小肠缺血再灌注肠道本身及肺损伤中的作用及可能机制。 方法:为探讨肠缺血再灌注后肺组织p38 很少 MAPK活化动态过程,10周龄健康雄性C57
BL/6小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注组(Ⅱ/R):再分为肠缺血45min再灌注即刻(0)、0.5h、4h和6h。为了进一步观察p38 MAPK活化在场缺血再灌注肺损伤的可能作用,动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注对照组(Ⅰ/R)和缺血再灌注+SB239063处理组(Ⅰ/R+SB239063组),Ⅰ/R+SB239063组于术前1h腹腔注入p38 MAPK抑制剂SB239063(3 mg.kg~(-1)),另两组注入等量生理盐水。采用夹闭C57BL/6小鼠肠系膜上动脉45 min后再灌注6h的造成肠缺血再灌注损伤模型。于再灌注6h麻醉后处死小鼠,取小肠、肺标本,Western blot蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38 MAPK蛋白水平;RT-PCR法检测小肠、肺组织TNF-α、IL-1βmRNA表达;HE染色,光学显微镜观察回肠及肺组织病理学改变,分别用Chiu方法肠损伤、Gloor方法肺损伤病理评分,评价回肠及肺损伤严重程度。 结果:(1)肠缺血后再灌注导致肺组织p38 MAPK蛋白快速、持续活化,与假手术组比较,差异有显著性(P＜0.01)。(2)肠缺血再灌注引起肠道局部及肺损伤,小肠、肺组织TNF-α、IL-1β基因表达水平显著升高。(3)在肠缺血后再灌注6h,SB239063抑制肺组织p38MAPK活化,下调肺组织TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,减轻肠缺血再灌注肺损伤(P＜0.