使用免疫共沉淀技术验证mTOR复合体和PKM2的相互作用。结果 高糖上调HUVECs中p-PKM2 Y~(105),MMP-1,PKM2四聚体,Rictor的蛋白质表达,促进PKM2核转位。沉默PKM2的表达或使用PKM2抑制剂TEPP-46可以阻止高糖引起的MMP-1的蛋白质表达上调。雷帕霉素逆转高糖引起的p-PKM2selleck Y~(105)和MMP-1的蛋白质表达上调。在高糖情况下,沉默Rictor后p-PKM2 Y~(105)的蛋白质表达下调,而沉默Raptor后p-PKM2 Y~(105)的表达上调。免疫共沉淀结果表明Rictor与PKM2存在直接结合。结论
目的 探讨视网膜小胶质细胞通过P2X7-NLRMdivi-1购买P3/caspase-1炎症小体通路介导的在脉络膜新生血管(CNV)发生中的作用机制。方法 40只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和CNV激光模型组。实验各组于激光照射后第4天取材,应用眼底荧光素血管造影(FFA)和光相干断层扫描(OCT)一体机观察激光照射处CNV是否形成;应用免疫荧光检INCB018424测视网膜冰冻切片P2X7和NLRP3/Caspase-1炎症小体和IL-1β的表达情况;分别运用Western Blot和实时荧光定量PCR检测CD11b、P2X7、NLRP3炎症小体、caspase-1和IL-1β蛋白含量表达和mRNA含量的表达情况。结果 FFA检查显示,CNV模型组激光斑处早期呈现强荧光改变,晚期荧光素渗漏增强,表明CNV生成;正常对照组无明显荧光素渗漏。