2.体内外研究证明Tcf7l1能够抑制肝癌干细胞的自我更新比较Tcf7l1在肝癌干细胞和非肝癌干细胞中的表达,发现Tcf7l1在肝癌干细胞中低表达,并且随着肝癌干细胞的分化Tcf7l1表达水平逐渐升高,提示Tcf7l1可能与肝癌干细胞干性状态密切相关。通过在肝癌干细胞中过表达Tcf7l1分子,发现可导致干性相关基因的下调,以及分化基因的表达上调。功能上,Tcf7l1过表达,显著Selleck抑制肝癌干细胞的克隆形成能力和成球生长能力,同时增加肝癌干细胞对化疗药物的敏感性。小鼠体内成瘤实验证明,Tcf7l1过表达能够抑制肝癌干细胞的动物体内成瘤能力,并抑制肿瘤的生长速度。3.证明Tcf7l1通过转录抑制干性基因Nanog,调控肝癌干细胞的自我更新蛋白免疫印迹检测显示Tcf7l1和干性转录因子Nanog在肝癌组织中的表达呈显著负相关,染色质免EPZ015938小鼠疫沉淀和荧光素酶报告实验证明,Nanog是Tcf7l1的直接靶基因,Tcf7l1可以调控Nanog的转录。进一步在非肝癌干细胞中干扰Tcf7l1,结果显示干扰Tcf7l1上调Nanog的mRNA水平和蛋白水平。功能上,干扰Tcf7l1显著提高非肝癌干细胞的克隆形成能力和成球能力,然而,这种作用可在进一步干扰Nanog后被阻断,由此证明Tcf7l1经由N4EGI-1anog分子调控肝癌细胞的自我更新。为了进一步明确Tcf7l1的调控作用是否依赖于β-catenin的结合,本研究构建β-catenin结合缺陷的截短形式的Tcf7l1表达载体。通过比较截短和全长形式的Tcf7l1对肝癌干细胞自我更新的作用,发现截短的Tcf7l1同样可以下调Nanog的表达,抑制肝癌干细胞的自我更新能力,且与全长Tcf7l1无显著差异。结果证明Tcf7l1对肝癌干细胞自我更新的调控作用不依赖于β-catenin。