0μg／ml、6小时／天，连续12天)。干预组雾化吸入丙烯醛同时分别给予罗格列酮2mg／kg、4mg／kg、8mg／kg管喂。提取支气管肺组织，采用HE染色及AB-PAS染色方法了解支气管肺组织的病理改变和气道杯状细胞增生情况；收集支气管肺泡灌洗液，采用ELISA法检测BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平；应用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学法及Western selleck产品 blot方法检测气道粘蛋白Muc5ac、PPARγ及NF-κB、I-κB等的表达水平。 结果丙烯醛刺激导致大鼠气道上皮Muc5ac mRNA和蛋白表达增高，支气管肺泡灌洗液中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平增高，同时气道上皮细胞NF-κB表达和NF-κB入核率增加，I-κB表达下降。相关性分析显示气道上皮细胞NF-κB的活化、BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平与Muc5ac
mRNA表达分别呈正相关。罗格列酮能上调PPARγmRNA和PPARγ蛋白的表达，并以浓度依赖性方式抑制丙烯醛所致的气道上皮Muc5ac表达增高，下调BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平，同时抑制气道NF-κB的活化及I-κB的降解。相关性分析显示气道PPARγ表达与气道NF-κB的活化、BALF中炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α水平及Muc5ac mRNA表达分别呈负相关。 结论丙烯醛致气道炎症和黏液高分泌过程与NF-κB的活化有关；PPARγ及其配体可以抑制丙烯醛诱导的气道炎症反应和气道黏液高分泌，其具体机制可能是通过抑制NF-κB的活化、中性粒细胞聚集和抑制炎性细胞因子的释放而发挥作用。
血流脉动的张应变在血管重建过程中起重要作用。周期性张应变加载至少包含3种信息:应变幅度、作用时间以及应变频率。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)在血管中的规则有序排列对于维持血管形态功能及力学特性非常重要。机械应力大小可以影响体外培养的VSMCs排列,但周期性张应变频率在调控VSMCs排列中的作用及其机制目前仍不清楚。 本文应用FX-4000T细胞张应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMCs施加不同频率相同幅度的周期性张应变,以0 Hz,即无加载频率、持续加载相同幅度张应变的VSMCs为对照组。通过图像分析测定细胞朝向角度,引入角信息熵(angle 也许 information entropy, AIE)评价细胞排列的规则程度;采用Logistic曲线方程对角度及熵值进行数值拟合与实验验证;通过realtime RT-PCR及western blotting及流式细胞技术检测VSMCs的integrin-β1、p38表达以及F/G actin比例;采用特异抑制剂阻断相应信号调节分子的活性或表达,研究了不同频率张应变在调控VSMCs排列中的作用及其机制。 结果显示:①不同频率张应变作用下VSMCs的有序排列程度明显不同。在一定时间内,1.25
Hz的张应变更能促进VSMCs有序排列,经过足够时间的周期性牵张后,较低频率可使VSMCs更有序排列;②张应变可以频率依赖地激活VSMCs的integrin-β1、Rac及p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度;③阻断信号分子Integrin-β1、p38以及破坏细胞骨架微丝系统可以显著影响不同频率张应变诱导的VSMCs朝向改变过程;④破坏细胞骨架微丝系统可使不同频率张应变作用下的integrin-β1活化受到抑制,阻断integrin-β1也可抑制p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度。 Fulvestrant分子量 上述结果表明,周期性张应变频率是VSMCs排列的重要调控因素,在一定范围内VSMCs排列应有其最敏感适频率。Outside-in及inside-out信号途径都参与了不同频率张应变调控VSMCs排列的信号转导过程,完整的细胞骨架微丝系统可能是感受应变频率信号的关键结构。周期性张应变频率调控体外培养的VSMCs排列的规律,有助于解释一些临床现象并对血管组织工程的细胞种植调控有重要参考价值。
目的 1观察钙调蛋白抑制剂N-(6-氨基己烷基)-5-氯-1萘-黄胺(W-7)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartate,NMDA)诱导的体外培养的乳鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及机制。
2观察钙调蛋白抑制剂W-7对戊四唑(Pentylenetetrazol,PTZ)诱导的癫痫大鼠模型的保护作用及机制。 方法 第一部分取原代培养7天的乳鼠大脑皮质神经元随机分为5组:(1)正常对照组:仅用杜氏改良低糖型F12培养基(Dilbecco’s modified eagle medium/F12,DMEM/F12)完全培养基。(2)NMDA损伤组:去除正常神经元培养液,加入NMDA 50μmol/L,处理时间10min。(3)3个剂量的W-7保护组:分别为保护组-1:25μmol/L,保护组-2:50μmol/L,保护组-3:100μmol/L,先加入W-7,培养24h后加入NMDA 50μmol/L。MTT法检测细胞存活力;在荧光显微镜下观察皮质神经元的形态;丫啶橙染色检测凋亡细胞数量;检测培养上清液中乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)含量;用免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内核转录因子κB(Nuclear factorkappa B,NF-κB)p65、p38半胱氨酸基天冬氨酸(Cysteiyl aspartate specificproteinase,MAPK)蛋白的表达。 第二部分健康SD大鼠38只,随机分为5组,对照组(腹腔注射生理盐水)、PTZ组(腹腔注射PTZ)和三个剂量的W-7组(腹腔注射PTZ和W-7)。观察行为学表现;脑组织中LDH含量测定;HE染色观察神经元的形态学改变;免疫组织化学方法和免疫印记方法检测海马组织NF-κBp65、p38MAPK和半胱氨酸基天冬氨酸(Cysteiyl aspartate specific proteinase,caspase)-3蛋白表达的变化。 结果 第一部分(1)同对照组比较,NMDA损伤组神经元凋亡增加(P＜0.01),W-7组减少,呈剂量依赖性(P＜0.05)。(2)NMDA组培养上清液中LDH含量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);W-7干预组LDH含量低于NMDA组,差异均有显著性意义(P＜0.