miRNA在很多生物的生理和病理过程中发挥重要作用,影响细胞凋亡、增殖,并与许多疾病相关。我们前期研究发现,ALDH2在心肌缺氧早期呈显著下降趋势。本研究拟从microRNA角度探讨ALDH2下降的机制,并探索内源性抑制ALDH2下降的作用靶点。方法利用实时定量PCR研究缺氧心肌细胞中miR34a及ALDH2 m什么RNA的表达情况,同时利用Western blot检测ALDH2蛋白表达,以观察miR34a与ALDH2在缺氧心肌细胞中变化趋势是否相关。在此基础上,利用microRNA特异模拟及抑制技术调控miR34a的表达,同时利用siRNA及高表达病毒转染技术调控ALDH2表达,观察miR34a与可能ALDH2的改变是否都能够改变心肌细胞缺氧后凋亡的反应情况。进一步利用miR34a特异模拟剂和抑制剂分别上调和下调microRNA的表达后,检测心肌细胞内ALDH2表达变化,以证实miR34a可以抑制ALDH2的翻译表达。进而,我们将采用荧光报告基因质粒技术,构建GFP后带有ALDH2 OTX015核磁3’UTR的报告质粒,同时与miR34a模拟剂共转染至HEK293细胞后观察GFP荧光亮度,从而得到miR34a与ALDH2 3’UTR结合的直接证据。结果在心肌细胞缺氧早期(48 h以内),我们发现ALDH2蛋白水平于6 h开始下降而其mRNA水平于48 h才出现显著降低,表明ALDH2蛋白在缺氧早期的下降并不是由转录水平调控引起的,提示可能存在转录后水平调节。