第二部分microRNA-539影响胰腺癌细胞生物学行为的体内外实验研究采用胰腺癌细胞株,利用RT-qPCR检测miR-539在胰腺癌细胞株及正常胰腺细胞中的表达水平,利用瞬时转染法把miR-539 mimics以及是阴性对照转染至人胰腺癌细胞株中,构建高表达的miR-539细胞模型,利用MTT实验来对胰腺癌细胞的增殖状态进行检测,利用Transwell小室侵袭实验来对胰腺癌细胞的寻找更多侵袭能力进行检测,利用划痕实验检测胰腺癌细胞迁移能力。在动物体内实验中,利用小鼠荷瘤实验来检测过表达miR-539对肿瘤生长的影响。结果显示miR-539在人胰腺癌细胞株ASPC-1、BXPC-3和PANC-1中表达显著下调,其结果与胰腺癌组织检测情况相符。过表达miR-539可以减弱人胰腺癌细胞株PANC-1和BXPC-3的增殖、侵袭以及迁移能力。在动物PF-04929113化学结构实验中,过表达miR-539可以抑制体内胰腺癌细胞的生长及增殖。第三部分microRNA-539靶基因的寻找及验证筛选和检验Twist1是否为miRNA-539的靶基因,为探讨miRNA-539的分子机制提供依据。我们利用生物学软件、miRNA数据库以及相关的文献分析预测了 miR-539的靶基因,双荧光素酶报告基因实验对靶基因进行了进一步的证实,结果显示Selleck GW3965Twist1为miR-539的直接靶基因,miR-539过表达显著抑制了胰腺癌细胞中Twist1的表达。第四部分microRNA-539靶向Twist1抑制胰腺癌细胞EMT采用人胰腺癌细胞株PANC-]为细胞模型,对miR-539负性靶向Twist1抑制胰腺癌细胞EMT做了初步的探讨。其结果显示过表达miR-539导致PANC-1细胞E-cadherin的蛋白含量显著上调,N-cadherin以及Vimentin的蛋白含量显著下调。