05)。5.大鼠脑缺血再灌注模型组P-AKT及P-GSK3β较假手术组升高(p<0.05),而丹参多酚酸盐干预后P-AKT及P-GSK3β表达升高较模型组更为显著(p0.05)。 结论:1.脑缺血再灌注后细胞凋亡增加,HSP22. P-AKT及P-GSK3β蛋白表达均高于对照组。2.丹参多酚酸盐可能通过增加大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中HSP22表达,同时升高P-AKT及P-GSK3β蛋白表达,抑制缺血再灌注后细胞凋亡,缓解细胞病理变化,减轻脑组织缺血再灌注损伤,而发挥神经保护作用。
目的利用DKK1重组蛋白干预染氟软骨细胞，观察干预前后染氟软骨细胞增殖及X型胶原的表达变化，探讨DKK1在氟性骨损伤骨周化骨病变中的作用及机制。 方法机械—酶消化法提取4周龄SPF级SD大鼠膝关节软骨细胞，分对照组和4个染氟组（5、10、20、40mg/L NaF溶液），MTT法测不同时段（24、48、72、96h）细胞增殖活性，ELISA测定细胞上清中COL-10及DKK1含量；取10mg/LNaF溶液剂量染氟72h的软骨细胞进行干预，分非干预组和3个干预组（1、2、4μg/L

RAD001数据表 DKK1重组蛋白PBS缓冲液），MTT法测各干预时段（0、12、24、36h）细胞增殖活性，ELISA测细胞上清中COL-10含量。 结果染氟软骨细胞MTT法检测结果显示，与对照组相比，在24h的5、10、20mg/L剂量组；48h时的5、10、20mg/L剂量组；72h时的5、10、20mg/L剂量组；96h时的10mg/L剂量组中细胞增殖活性明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。COL-10含量在不同时段各染氟剂量组与对照组相比，均显著升高（P0.05），48h时，仅10mg/L剂量组COL-10含量（254.10±23.01）ng/L显著高于5mg/L剂量组（230.36±12.50）ng/L（P0.05）；48h时，20mg/L剂量组DKK1含量（24.74±0.95）μg/L显著高于对照组（20.87±2.46）μg/L（P<0.05）；24h时，干预B组细胞增殖活性显著降低（P<0.05）；36h时，干预A组细胞增殖活性显著升高，C组则显著降低（P0.05）；干预24h后，干预B、C两组COL-10含量（209.79±14.42）ng/L、（216.68±16.66）ng/L显著低于非干预组（246.26±12.41）ng/L（P
背景：阿尔茨海默病(Alzheimer’s

很少 disease,AD)是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状（抑郁、焦虑不安、幻觉、妄想和失眠等）和行为障碍（踱步、攻击行为、坐立不安等）；主要病理特征是胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)、胞外老年斑(Senile Plaques, SP)的聚集及神经元进行性丢失等。过度磷酸化的tau是胞内神经原纤维缠结的最主要的成分。研究发现组蛋白去乙酰化酶2（Histone Akt抑制剂 deacetyltransferase-2，HDAC2）在AD病人脑中、AD转基因小鼠模型CK-p25和5xFAD及体外AD相关的神经毒性损伤模型中表达量均显著增加，并且其含量增加与部分学习记忆及突触可塑性相关蛋白表达量的下降密切相关，敲除HDAC2可以有效逆转AD转基因小鼠的神经退行性病变。但老年痴呆患者中增加的HDAC2与磷酸化的tau之间的关系尚不清楚。

目的：离体水平探讨HDAC2的水平升高与AD样tau蛋白过度磷酸化之间的关系及可能的机制。 方法：蛋白免疫印迹技术检测瞬时转染pEGFP-HDAC2于HEK293/tau细胞(人胚肾293细胞稳定转染人tau全长蛋白)内后微管相关蛋白tau的磷酸化水平的改变情况及tau磷酸化相关激酶和酯酶的蛋白含量和活性水平；免疫共沉淀检测HDAC2与GSK-3β之间是否有直接作用；细胞免疫荧光技术检测HDAC2和GSK-3β在细胞内的分布和定位情况。 结果： 1. HDAC2导致293/tau细胞中tau蛋白pT231、pS404位点过度磷酸化：过表达HDAC2明显增加了293/tau细胞中pT231、pS404位点磷酸化水平，分别至140.2%(p=0.017)和150.7%(p=0.0058)，总tau含量未发生改变； 2.同家族的HDAC1、HDAC3不改变tau磷酸化水平：过表达I型HDACs的其它两个成员HDAC1、HDAC3后293/tau细胞内pT231、pS396、 pS404、R134d含量均未变化（p>0.05）； 3. HDAC2激活GSK-3β使tau过度磷酸化：过表达HDAC2后检测t-GSK-3β、pS9-GSK-3β、pY216-GSK-3β后发现GSK-3β的抑制性位点磷酸化的s9蛋白水平降低而t-GSK-3β并无变化，此外，pS21-GSK-3α，t-GSK-3α的含量也并未发生改变，表明HDAC2过表达后激活GSK-3β，而非GSK-3α；同时检测其他tau磷酸化相关的激酶PKA、PKC、ERK及酯酶PP2Ac发现他们的蛋白水平和活性并没有随着HDAC2的过表达而变化，这些结果提示，HDAC2过表达引起的tau过度磷酸化可能是通过激活GSK-3β而不是PKA、PKC、ERK或PP2A起作用。pEGFP-N1-dnGSK与HDAC2共转后tau磷酸化水平没有上升（p>0.05）及转染HDAC2后给予GSK-3β抑制剂SB216763均不改变tau磷酸化水平进一步证明GSK-3β激活介导了HDAC2过表达引起的tau过度磷酸化。 4.