方法ASCI大鼠鞘内注射miR-182 agomir/miR-7a agomir,BBB评分评价大鼠脊髓功能恢复情况,荧光定量PCR检测损伤区脊髓PRDM5的m RNA表达水平,Western blot检测损伤区脊髓PRDM5和c-caspase3蛋白表达水平。结果鞘内注射miR-182 agomir和miR-7a agomir显著改善ASCI大鼠神经功能,PRDM5的SBE-β-CD鐢熶骇鍟唡SBE-β-CD鐮旂┒璐拱m RNA表达水平显著降低,PRDM5和c-caspase3蛋白表达水平显著降低。结论miR-182和miR-7a通过调控PRDM5参与脊髓损伤修复过程,过表达miR-182和miR-7a能促进大鼠神经功能恢复,两者具有协同效果。
1.异育银鲫尾鳍细胞系的建立及其对CyHV-2的敏感性研究本实验中,我们建立了异育银鲫尾鳍细胞系,命名为GiJPH203CF。原代培养的GiCF细胞形态多样,主要呈上皮样细胞和纤维样细胞的特点,稳定传代后细胞呈纤维样细胞的特点。该细胞系在20-30℃温度范围内均可生长,最适生长温度为25℃。染色体数目分布在140-166之间,有35%的中期分裂相的染色体纵数在156,3n=156为三倍体。用从患病异育银鲫肾脏和脾脏中提取的病毒悬液感染GiCF细胞,7天后细胞出现Tariquidar IC50明显的病变现象,细胞收缩、变圆、脱落和细胞质空泡化;感染9天后,病变现象更加明显,出现大量的细胞脱落现象。用传至20代的CyHV-2感染细胞,细胞病变情况更加严重,感染7天后,细胞大量脱落、死亡,证明GiCF细胞对CyHV-2敏感,可用于CyHV-2的增殖。另外,CyHV-2感染GiCF细胞后出现明显的凋亡小体,TUNEL染色也能观察到明显的凋亡阳性信号,AnexinⅤ/PI染色结果表明病毒感染后发生凋亡细胞的数量显著上升。