000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log

Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、 p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020), p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-△△ct平均值分别是14.83、19.78, t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-ΔΔct平均值分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均值分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2-－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异的原因之一。维、汉之间mTOR及其下游分子mRNA与磷酸化蛋白检测的结果不一致,因而mRNA的检测不能代表维、汉乳腺癌中mTOR信号通路的激活状态。

通常 第一部分：mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌中的表达和临床意义 目的：探讨磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织和癌旁组织中的表达部位、表达量以及蛋白表达的相关性。探讨磷酸化mTOR、4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌患者当中与各临床指标以及预后的关系。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,使用免疫组化检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况及其相互关系,以及与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量,分析mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的相互关系。结果:p-mTOR表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285), PD98059 p=0.001; p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。p-mTOR在癌组织与癌旁组织中定位表达未见明显统计学差异(p=0.554); p-4EBP.1和p-S6K1在癌组织和癌旁组织中的定位表达有显著统计学差异(p分别为0.001和0.000)。Western-blot结果提示p-mTOR、p-4EBP1和p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值均高于癌旁组织(P值分别为0.001、0.725和0.473)。p-4EBP1在维、汉民族之间的表达有统计学差异(p=0.020,r=0.138),

p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化4EBP1和S6K1在细胞浆中表达增高可能与乳腺癌的发生相关。p-4EBP1的表达可能是维、汉民族之间差异的原因之一；4EBP1和S6K1的表达不能作为乳腺癌预后的独立指标。 第二部分：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白表达在转录水平的调控研究 目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白在新疆维汉乳腺浸润性乳腺癌组织中的表达情况,以及是否受其相应mRNA表达的调控。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织与癌旁组织病理切片,使用免疫组化方法染色,通过染色结果评价磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用Western-blot蛋白检测方法检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。随机收集2012年1月至2012年6月期间126例就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的新鲜乳腺癌及癌旁组织标本,使用荧光定量rtPCR方法检测mTOR、4EBP1和S6K1在癌组织和癌旁组织中的mRNA水平并进行对照研究。结果：新疆维、汉族浸润性乳腺癌组织和癌旁组织病理切片中p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),p=0.001; JAK inhibitor p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,P值均小于0.01,差别均有显著统计学差异,p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织。Western-blot结果提示p-mTOR在癌组织中表达的灰度平均值是1.490,癌旁组织是0,p=0.001;p-4EBP1在癌组织中表达的灰度平均值是1.759,癌旁组织是1.676,p=0.

分析肺癌患者临终前六个月治疗手段,了解肿瘤患者临终前治疗手段的选择情况；通过分析患者临终前六个月支持手段及症状缓解的情况,寻求肿瘤终末期的最佳治疗手段,为以中医药为主体的治疗模式作为肿瘤终末期治疗手段提供临床依据；2.通过对病例进行回顾性研究,探讨中西医结合治疗晚期肺癌的临床疗效；通过分析中西医结合治疗对晚期肺癌生存期的影响,为以中医药为主体的治疗模式治疗晚期肺癌提供可靠的临床依据；3.探索如何发挥中医药优势,创造适合我国晚期肺癌患者的最佳治疗模式,为临床治疗提供参考。[研究方法]本研究采用回顾性研究方法总结2009年10月至2014年11月在东方医院肿瘤科住院的肺癌死亡病例334例,统计患者总治疗手段和临终前6个月治疗手段,归纳治疗模式,分析各治疗模式对生存期的影响；对临终前6个月患者所使用的支持手段进行分析,探讨临终前6个月治疗手段与支持手段的相关性,对以中医药为主体的治疗模式作为终末期肿瘤患者治疗手段的临床价值进行评估。[结果]1.人口学及肿瘤相关因素分析：男女比例约为2：1;68.3%为老年患者,其中以70-79岁人数最多,占39.5%；男性以小细胞和鳞癌居多,女性以非吸烟腺癌者居多；87.4%患者确诊时已为肺癌中晚期；2.不同治疗模式对生存期影响：晚期小细胞肺癌：传统治疗可延长晚期小细胞肺癌生存期(P<0.05)；单纯中医未能使晚期小细胞肺癌生存期获益；非小细胞肺癌：综合治疗和传统治疗均可延长晚期肺鳞癌患者生存期生存期(P0.05)；靶向治疗未能使肺鳞癌患者获益(P>0.05)；综合治疗使肺腺癌生存期获益最大,其次是传统模式(P<0.05),两组有统计学差异；靶向治疗可延长晚期病理类型不详者的生存期(P<0.05)；而激素的使用率和使用天数也低于中西医结合组(P<0.1)；7.对于生存期较长病例进行分析：腺癌和鳞癌明显优于小细胞癌,腺癌与鳞癌差别并不明显,但在2年以上生存方面腺癌优势明显,性别方面,男女在各个阶段比例差异并不明显；[结论]1.早期积极综合治疗可使晚期肺癌患者生存期获益,生存期得到延长；2.在本课题中,中西医结合治疗晚期非小细胞肺癌与单纯西医治疗的相关文献相比,可延长患者生存期；3.本课题显示约47.4%患者在终末期选择单纯中医药支持治疗,40%患者仍选择具有损伤性的抗肿瘤治疗作为终末期治疗；4.单纯中医治疗能明显缓解终末期肺癌患者症状,提高患者终末期生活质量,可作为患者终末期姑息治疗和临终关怀手段之一。
肺癌的发病率和死亡率均居所有恶性肿瘤的首位。约85%的新诊断肺癌患者为非小细胞肺癌(non-small

也许 cell lung cancer, NSCLC)。而肺鳞癌作为NSCLC的主要组织学类型之一,约占NSCLC患者的30%。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal Bleomycin临床实验 growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI)及间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)抑制剂的发现显著改善了具有EGFR敏感突变和ALK基因重排NSCLC患者的生存。但是,这些靶向药物主要针对肺腺癌,对肺鳞癌则鲜有疗效。而目前尚无针对肺鳞癌的靶向药物上市。因此,在肺鳞癌中寻找药物可作用的分子靶点成为推进肺鳞癌靶向治疗研究的关键。本研究通过对中国人群肺鳞癌基因突变和拷贝数变异的检测,旨在建立具有中国人群特征的肺鳞癌遗传变异谱,识别肺鳞癌中潜在的药物作用靶点,促进肺鳞癌靶向治疗的研究进程,提高我国肺鳞癌患者个体化治疗整体水平,推进肺鳞癌精准医疗的发展。本论文研究内容分为两个部分：第一章：基于下一代靶向测序技术的肺鳞癌基因突变检测。本部分研究以159例肺鳞癌为研究对象,采用Ion 查找更多 Torrent下一代靶向测序技术(targeted next-generation sequencing, NGS)检测50个癌基因和抑癌基因中约2,800个COSMIC突变位点。分析肺鳞癌中基因突变与患者临床病理学特征、无疾病生存期(disease-free survival, DFS)及总生存期(overall survival, OS)的关系。结果显示,在我国肺鳞癌中突变率最高的基因为TP53(56.0%,89/159),其次为CDKN2A(8.8%,14/159), PI3KCA (8.8%,14/159), KRAS (4.4%,7/159), EGFR (3.1%,5/159), FBXW7 (2.5%, 4/159), PTEN (2.5%,4/159), FGFR3 (1.3%,2/159), AKT1 (1.3%,2/159)及KIT(0.6%,1/159)。在117例含有突变的肺鳞癌样本中,89例样本(56.0%)仅含有1个突变,28例样本(17.6%)同时含有2个及2个以上的突变(双突变或共突变)。TP53基因突变率在男性和吸烟肺鳞癌患者中显著高于女性和不吸烟肺鳞癌患者。而女性和不吸烟肺鳞癌患者的EGFR突变率显著高于男性和吸烟肺鳞癌患者。生存分析发现,各基因突变与患者的DFS和OS无显著相关性。第二章：中国人群肺鳞癌基因拷贝数变异检测。本部分研究采用荧光原位杂交技术(FISH)检测了250例肺鳞癌样本中FGFR1、EGFR、HER2、PDGFRA、CCND1、

SOX2、CDKN2A及PTEN等8个基因的拷贝数变异情况。同时,我们采用免疫组织化学技术(IHC)检测了PTEN蛋白的表达情况。分析肺鳞癌中8个基因拷贝数变异状态与患者临床病理学特征、DFS及OS的关系。结果发现,在我国肺鳞癌中FGFR1扩增、EGFR扩增、HER2扩增、PDGFRA扩增、CCND1扩增、SOX2扩增、CDKN2A纯合性缺失.PTEN基因缺失及PTEN蛋白表达缺失的发生率分别为13.7%(34/248)、12.6%(31/246)、10.2%(25/246)、7.7%(19/246)、11.0%(27/246)、32.1%(79/246)、21.5%(53/246)、17.9%(44/246)及43.5%(108/248)。其中,FGFR1扩增、CCND1扩增及SOX2基因扩增与吸烟显著相关。淋巴结转移阴性患者的FGFR1基因扩增发生率显著高于淋巴结转移阳性的患者(19.4% vs.10.2%,P=0.043)。胸膜侵犯阳性患者的PTEN蛋白缺失率为51.2%,显著高于胸膜侵犯阴性患者的PTEN蛋白缺失率(36.2%,P=0.017)。PTEN蛋白质表达缺失与PTEN基因缺失显著相关(P=0.025)。生存分析发现,PTEN基因缺失与较长的OS显著相关(P=0.

Moreover, co-treatment of microglia with SB216763 and morphine led to a significant synergistic effect on the level of phospho-p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK). In addition, inhibition of p38 MAPK by its specific inhibitor SB203580 significantly inhibited morphine-induced apoptosis 购买PD0325901 and caspase-3 activation. Taken together, our data clearly demonstrates that morphine induces apoptosis in microglial cells, which is mediated via GSK-3βand p38 MAPK pathways.
哺乳动物基因的表达模式同其分子结构特征之间的关联以及这些结构特征的进化规律是生物学中基本问题,但这些问题仍有待深入研究。发育进程被认为对于探索进化机制至关重要,而哺乳动物的干细胞分化系统,包括干细胞,祖细胞和其分化产物,也提供了一个描述哺乳动物发育进程的理想模型。因此,本文以小鼠干细胞分化模型中与发育阶段相关的基因表达模式为基础,试图建立哺乳动物基因的表达模式与其分子结构特征之间的关联。

在不同的细胞类型中,我们建立了基因表达量同密码子使用偏好的关联。我们发现,处于不同发育阶段的细胞,其优化密码子可能会有所不同。在小鼠基因中,GC结尾密码子的使用在整体上占据优势;但我们却在相当多种类的处于早期发育阶段的干细胞和祖细胞中,发现优化密码子以AT结尾。我们还发现,在不同发育阶段中富集表达(发育阶段关键基因)或特异性表达(发育阶段特异性基因)的基因,也可能具有不同的密码子使用模式。而且,对于同一个发育阶段,特异性表达的基因与富集表达的基因相比,往往使用更多的以GC结尾的同义密码子。进一步的分析暗示,上述与发育阶段相关的密码子偏好模式,特别是以AT结尾的优化密码子在很大程度上与翻译选择模型的预言相一致。 在哺乳动物中,基因的密码子偏好(GC3)与基因所在基因组区域的GC含量(GCg)密切相关。我们的结果表明,小鼠基因所在基因组区域的GCg也同其发育阶段相关。进一步,我们还分析了小鼠发育阶段相关基因在基因组上分布和排列的规律。我们发现,发育阶段相关基因在各个染色体上的分布并不均匀,这可能意味着各个染色体对分化进程的贡献各异。我们还发现,很多与发育阶段密切相关的基因在染色体上呈现成簇分布的状态,并且,簇内基因与簇外基因相比,偏好于使用更多以GC结尾的同义密码子。

而且 我们接下来通过比较基因组学的方法研究了发育阶段相关基因在起源和进化上的初步规律。首先,我们的结果表明,高表达基因的进化速率要低于中—低表达基因的进化速率,这暗示在人—小鼠以及大鼠—小鼠分歧后对高表达基因的负选择仍然有效。与之相反,对于那些在某个发育阶段中选择性表达的发育阶段关键基因或发育阶段特异性基因,其进化速率往往显著高于那些表达模式不随发育阶段变化的基因。较高的进化速率暗示这些基因在人—小鼠以及大鼠—小鼠分歧后可能受到了不同的功能性制约。其次,我们发现,热血动物的直系同源基因间具有比较相似的密码子偏好模式,这暗示了小鼠的密码子使用偏好在热血动物共同祖先出现时已基本固定。最后,我们还发现,高表达基因与中—低表达基因相比,以及表达模式不随发育阶段变化的基因同在某个发育阶段中选择性表达的发育阶段关键基因或发育阶段特异性基因相比,通常能够在果蝇基因组中找到更多的直系同源基因。我们的结果表明,小鼠基因的表达模式和分子特征均与其古老程度相关。 上述分析依赖于已发表的小鼠干细胞及其分化产物的高通量表达数据;而且,这些数据中仅包括来自外胚层和中胚层的前体细胞。我们接下来要探索,在内胚层的分化路径中,小鼠基因的密码子偏好,基因组GC含量,基因分布和基因年龄是否仍同与发育阶段相关的基因表达模式有关。我们在小鼠成体胰腺的体外培养体系中鉴定了一群具有增殖和多向分化能力的前体细胞,并发现这群细胞分布于胰岛中和导管周边。我们进一步分析了该群前体细胞和胰腺成熟内分泌细胞(胰岛)的基因表达谱,发现在胰腺前体细胞和胰岛细胞组成的分化模型中,基因分子特征,基因组特征和起源进化的相关规律也在相当的程度上与其所处的发育阶段有关,且基本规律与我们在外胚层和中胚层中观察到的相同或相近。

在本文中,我们应用干细胞分化模型,为研究哺乳动物分子进化中的一些关键问题提供了有价值的线索。例如,我们发现了哺乳动物密码子偏好使用的新规律,提出了支持自然选择作用于哺乳动物同义位点的新证据。此外,我们的研究结果对于理解哺乳动物基因的进化历程和哺乳动物基因组GC含量的潜在生物学意义都提供了新的途径。 这项研究将分子进化的理论分析引入干细胞领域,对于从结构特征的角度,在基因组尺度上理解干细胞的标志性分子和分化机理也具有一定的意义。我们的结果显示,干细胞和成熟细胞差异表达的基因在分子结构特征上存在差异;并且,在干细胞分化进程中经历结构变化的染色质片段,也可能与这些片段的GC含量有关。我们的这些结果,其深入意义还有待于进一步的研究和开掘。
目的观察不同浓度和不同给药模式七氟醚后处理对体外循环(CPB)下行冠状动脉旁路移植术(CABG)病人的心肌保护作用。 JQ1分子重量 方法选择体外循环下行CABG的病人75例,以随机、对照、单盲法分为对照组(Cont)、持续1MAC七氟醚后处理组(APOC-1)、持续2MAC七氟醚后处理组(APOC-2)、间断1MAC七氟醚后处理组(APOI-1)和间断2MAC七氟醚后处理组(APOI-2)五组,每组15例。采用全凭静脉麻醉。对照组不加以任何干扰措施。APOC-1组于乳内动脉至前降支吻合口开放前2分钟从体外循环机中吹入1.0MAC七氟醚预充,乳内动脉桥吻合口开放后继续吹入1.0MAC的七氟醚并持续15min; APOC-2组吻合口开放后继续吹入2.0MAC的七氟醚并持续15min; APOI-1组吻合口开放后吹入1.0MAC的七氟醚5mmin,停药5min后再次恢复给药5min,共计15min; APOI-2组吻合口开放后继续吹入2.0MAC的七氟醚5min,停药5min后再次恢复给药5min,共计15min。观察围术期血流动力学指标；分别于体外循环前、主动脉开放后6h和手术结束后24h收集中心静脉血、检测血浆CK、CK-MB、LDH和心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度的变化；并在主动脉阻断前和开放后30min取右心房标本对照观察心肌组织形态学的变化。 结果所有入选病例均顺利完成试验,未见明显不良反应,均康复出院。五组病例一般资料无明显差异(p>0.